SAAFA-76-MRRRCH
Mécanismes oxydatifs impliqués dans l’athérogenèse
Il est aujourd’hui bien établi que les modifications oxydatives des LDL représentent un élément important dans la physiopathologie de l’athérosclérose et augmente le risque de MCV (Skalicky et al., 2008 ; Wierzbicki & Grant 2016) par l’intermédiaire d’une cascade de réactions (décrite brièvement ci-dessous), la plupart au niveau de la paroi artérielle (Berrougui et al., 2006 ; Parthasarathy et al., 2008 ; Venkadeswaran et al., 2016): 1-Augmentation de la concentration des LDL plasmatiques et/ou dysfonctionnement endothélial entraînant la rétention des LDL au niveau de l’intima ; 2-Oxydation des lipides des LDL qui dépend à la fois de la susceptibilité des LDL à l’oxydation et des systèmes de protection qui sont sous la dépendance d’antioxydants d’origine alimentaire ; 3-Recrutement chimiotactique des monocytes circulants et leur différentiation en macrophages. Au cours de cette étape, les LDL oxydées ne sont pas reconnues par les Revue bibliographique 13 LDLr, ils induisent ainsi une perte de leur reconnaissance par ces derniers par les produits de la peroxydation lipidique par modifications oxydatives de l’apo B-100 et sont éliminées par les monocytes et le cholestérol est finalement déposées dans la paroi artérielle. Une fois les lipides attaqués par les espèces réagissant à l’oxygène, se forme un radical carbone qui réagit ensuite avec un radical peroxyl générant des peroxydes lipidiques (Pincemail et al., 1996 ; Temple, 2000). Les LDL oxydées sont ensuite captées par les macrophages. 4- L’ultime étape consiste à la rétention des macrophages chargés de lipides au niveau de l’intima. Les LDL oxydées ont alors comme conséquences, une déplétion en antioxydants et en AGPI et la formation de diènes conjugués et des produits d’oxydation lipidique spécifiques. Quant à l’oxydation de l’apo B, il résulte en une oxydation des AA, des carbonylations et la formation de produits entre AA et produits aldéhydiques. Les macrophages, internalisent de grandes quantités de LDL oxydées par l’intermédiaire de récepteurs scavenger et se transforment en cellules spumeuses aboutissant à la formation des facteurs pro-inflammatoires et pro-thrombogénes qui favorisent la progression de la plaque d’athérome (De Winther et al., 2000) (Fig. 5). La dysfonction endothéliale constitue aussi le facteur clé dans le déclenchement et la progression de l’athérosclérose (Paul & Baudin, 2009).
Hypercholestérolémie et inflammation
Les études expérimentales les plus récentes réalisées chez l’Homme associées aux observations anatomo-pathologiques faites sur des plaques athéromateuses, permettent d’affirmer aujourd’hui que l’athérosclérose est une maladie inflammatoire chronique des grosses artères à localisation intimale, l’agent d’agression entraînant la réaction inflammatoire étant le C-LDL sous une forme oxydée (Harrison et al., 2011 Hermida & Balligand, 2014). En effet, les travaux menés ces dix dernières années montrent clairement qu’elle correspond à un processus inflammatoire chronique qui peut aboutir à un événement clinique aigu par rupture de la plaque d’athérosclérose puis thrombose (Rodríguez et al., 2009 ; Salisbury & Bronas, 2014). L’initiation du phénomène correspond au passage dans l’espace sous-endothélial des lipoprotéines athérogènes qui sont retenues dans l’intima et subissent des modifications oxydatives. Les lipoprotéines Revue bibliographique 14 oxydées (principalement des LDL oxydées) activent les cellules endothéliales qui expriment des molécules d’adhésion et sécrètent des facteurs chimiotactiques responsables du recrutement des monocytes et lymphocytes T circulants qui migrent dans le sous-endothélium (van Berkel et al., 2005 ; Wang et al., 2007; Paul & Baudin, 2009). Les monocytes se différencient en macrophages qui expriment des récepteurs « scavenger » permettant l’internalisation des lipoprotéines oxydées ce qui aboutit à la formation de cellules spumeuses (Fig. 5). La sécrétion de cytokines pro-inflammatoires, de protéases, de substances vasoactives et de facteurs de croissance intensifie l’inflammation locale et permet la croissance de la plaque d’athérosclérose (Paul & Baudin, 2009).
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Table des matières
INTRODUCTION
REVUE BIBLIOGRAPHIQUE
1- Hypercholestérolémie, facteur de risque des MCV
2- Hypercholestérolémie, dyslipidémie et athérosclérose
2-1- Définition, étiologie et caractéristiques physiopathologiques de l’athérogenèse
2-2- Rôle athérogène des LDL
3- Hypercholestérolémie, stress oxydant et processus inflammatoire
3-1- Hypercholestérolémie et stress oxydant
3-2- Mécanismes oxydatifs impliqués dans l’athérogenèse
3-3- Hypercholestérolémie et inflammation
4- Rôle athéro-protecteur des HDL
5- Nutrition et Hypercholestérolémie
5-1- Effets des lipides alimentaires sur les facteurs de RCV
5-1-1-Implication du cholestérol alimentaire dans le développement de l’hypercholestérolémie
5-1-1-1- Chez l’Homme
5-1-1-2- Chez l’animal de laboratoire
5-1-2- Impact des AG alimentaires, en particulier les AGPI n-3 sur le RCV
5-1-2-1- AGPI n-3 et dyslipidémie
5-1-2-2- AGPI n-3 et insulino-résistance
5-1-2-3- AGPI n-3, stress oxydant et dysfonction endothéliale
5-2- Effets des protéines alimentaires sur les facteurs de RCV
5-2-1- Protéines de poisson et dyslipidémie
5-2-2- Protéines de poisson, insulino-résistance et dysfonction endothéliale
5-2-3- Protéines de poissons et stress oxydant
5-3- Interactions entre les protéines de poisson et les lipides alimentaires
6- Le Lait de vache : Composition, efficacité nutritionnelle et effets biologiques et cardioprotecteurs
6-1- Composition et efficacité nutritionnelle
6-1-1- Les matières azotées totales (MAT
6-1-2- Les matières grasses du lait
6-1-3- Le cholestérol
6-2- Effets cardio-protecteurs du Lait : Rôle des protéines et de la matière grasse
6-3- Effets de la matière grasse sur le RCV
6-4- Effets cardio-protecteurs des protéines du lait de vache
7- Modèle expérimental
8- Choix du Poisson
9- Choix du lait
1-Matériel biologique
1-1- Processus d’extraction de l’huile et des protéines de sardine
1-2- Détermination de la composition des protéines de sardine
1-2-1- Détermination des protéines (Azote x 6,25)
1-2-2- Détermination des lipides totaux
1-2-3- Dosage des cendres
1-2-4- Estimation de la teneur en eau
1-2-5-Analyse de la composition des protéines de la sardine en AA
1-2-6- Analyse de la composition de l’huile de sardine en AG
1-3- Processus d’obtention de la matière grasse du lait
2- Animaux et régimes
3- Prélèvement des échantillons sanguins et des organes
4- Analyses biochimiques
4-1- Détermination des teneurs sériques et hépatiques en différents lipides
4-1-1- Dosage des lipides totaux
4-1-2- Analyses des différents composants lipidiques
4-1-2-1- Dosage du cholestérol total, libre et estérifié
4-1-2-2- Dosage des triglycérides
4-1-2-3- Dosage des phospholipides
4-2- Détermination des teneurs en protéines totales sériques et hépatiques
4-3-Séparation et analyse des teneurs et composition des différentes fractions de lipoprotéines sériques
4-3-1- Technique de précipitation
4-3-1-1- Séparation des lipoprotéines de faible densité
4-3-1-2- Séparation des lipoprotéines de haute densité
4-3-2- Purification des différentes lipoprotéines
4-3-3- Analyse des teneurs et composition des lipoprotéines en lipides et en protéines totales55
4-4- Dosage de l’activité de la LCAT
4-5- Détermination des marqueurs de l’équilibre glycémique
4-5-1- Dosage de la glycémie
4-5-2- Dosage de l’insuline
4-5-3-Evaluation de l’indice HOMA-IR
4-6- Evaluation du statut redox
4-6-1- Détermination de la peroxydation lipidique au niveau sérique et tissulaire
4-6-1-1- Dosage des teneurs en substances réactives à l’acide thiobarbiturique (TBARS
4-6-1-2- Détermination des teneurs en hydroperoxydes
4-6-2- Détermination de l’oxydation protéique
4-6-3- Evaluation de la défense antioxydante enzymatique
4-6-3-1- Dosage de l’activité de la glutathion peroxydase
4-6-3-2- Dosage de l’activité de la glutathion réductase
4-6-3-3- Dosage de l’activité de lasuperoxyde dismutase
4-6-3-4- Dosage de l’activité de la catalase
4-6-3-5- Dosage de l’activité de la paraoxonase (PON1
4-6-4- Dosage du monoxyde d’azote (NO
4-6-5- Evaluation d’autres marqueurs de RCV
4-6-5-1- Dosage de l’albumine sérique
4-6-5-2- Dosage de l’acide urique (AcU
4-6-5-3- Dosage des apo A-I et B sériques
4-6-5-4- Dosage du fibrinogène plasmatique
4-6-5-5- Dosage du fer sérique
5- Analyse statistique
1- Composition chimique des protéines de sardine comparée à la caséine
2- Composition de l’huile de sardine et de la matière grasse du lait en AG
3- Evolution du poids corporel et nourriture ingérée
4- Poids absolu et relatif des organes
5- Teneurs en protéines et en différents lipides du sérum et du foie
6- Teneurs sériques en cholestérol total (CT) et répartition entre les différentes fractions de
lipoprotéines
7- Teneurs sériques en triglycérides (TG) et répartition entre les différentes fractions de
lipoprotéines
8- Teneurs et composition en protéines (apolipoprotéines) et en lipides des différentes
fractions de lipoprotéines sériques (VLDL, LDL-HDL1, HDL2 et HDL3)
8-1- Teneurs et composition en lipides et en protéines des VLDL
8-2- Teneurs et composition en lipides et en protéines LDL-HDL1
8-3- Teneurs et composition en lipides et en protéines des HDL2
8-4- Teneurs et composition en lipides et en protéines des HDL3
9- Activité de la lécithine : cholestérol acyltransférase (LCAT
10- Glycémie, insulinémie et indice de HOMA-IR
11- Statut oxydant et antioxydant
11-1- Peroxydation lipidique
11-1-1- Concentrations des TBARS au niveau du sérum et des lipoprotéines
11-1-2- Concentrations des TBARS tissulaires
11-1-3- Teneurs en hydroperoxydes sériques
11-1-4- Teneurs en hydroperoxydes tissulaires
11-2- Oxydation protéique
11-2-1- Teneurs sériques en carbonyles
11-2-2- Teneurs tissulaires en carbonyles
11-3- Evaluation de la defense antioxydante enzymatique
11-3-1- Au niveau érithrocytaire
11-3-2- Au niveau tissulaire
11-3-3- Activité de la paraoxonase 1 (PON1)
11-4- Teneurs sériques et tissulaires en monoxyde d’azote (NO)
12- Autres paramètres du RCV
12-1- Teneurs sériques en albumine, AcU, Apo A-I et Apo B
12-2- Concentrations du fibrinogène plasmatique et du fer sérique
12-3- Fluidité membranaire
DISCUSSION
CONCLUSIONS & PERSPECTIVES
REFERENCES BIBLIOGRAPHIQUES
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