Soutenance mémoire
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PARTIE PHARMACOLOGIQUE
L’extrait MI308 a été préparé sous-forme de crème pour faciliter son application. Cette crème a été appliquée, une fois par jour sur une plaie expérimentale ouverte chez le rat. La crème utilisée est une émulsion eau dans huile, où la phase aqueuse est dispersée dans la phase grasse. La phase aqueuse a été constituée d’eau distillée et de bicarbonate, tandis que la phase grasse a été composée d’huile de tournesol et de cire d’abeille (AQUINO, 2002).
Préparation de la crème de base
Pour préparer la crème de base, 15 g de cire d’abeille ont été râpées puis fondues à la température de 80°C dans un bain marie. Ensuite, elle a été lavée à chaud quatre fois avec de l’eau de javel pour la blanchir, puis séchée en l’exposant au soleil. Pour prépare la phase aqueuse, 25 g de bicarbonate de soude ont été dissouts dans 75 ml d’eau distillée, et le mélange a été chauffé au bain marie, à la température de 80°C. Dans un autre récipient, la cire blanchie, et l’huile de tournesol ont été chauffées ensemble dans un bain marie, à la température de 80° C. Puis, la phase aqueuse a été versée petit à petit dans la phase grasse tout en fouettant avec une batteuse électrique jusqu’à l’obtention d’un mélange homogène. Ensuite, la crème a été laissée se refroidir à la température ambiante (DALLY, 2007). (Tableau II).
Préparation de la crème contenant 10 % d’extrait
Pour préparer la crème utilisée dans les tests biologiques, 10 g de l’extrait ont été mélangés avec 90 g de crème de base. La crème ainsi préparée a été conservée dans un récipient fermé, à la température ambiante.
Animaux d’expérimentation
L’activité de l’extrait MI 308, a été étudiée chez le rat de race Wistar, de même sexe, âgés de 3 mois et pesant entre 160 et 200 g. Les animaux ont été élevés dans les mêmes conditions à l’animalerie du Laboratoire de Pharmacologie Générale, de Pharmacocinétique, et de Cosmétologie (LPGPC), de la Faculté des Sciences de l’Université d’Antananarivo, avec un cycle de lumière et d’obscurité de 12/12 h, et à la température de 23° C environ. Ils ont été nourris avec des granulés de provende (LFL 1420), et ont eu un accès libre à de l’eau.
Création des plaies
Pour créer les plaies, les animaux ont été anesthésiés par inhalation d’éther diéthylique. Les poils sur une surface de 8 cm2 au niveau de leur zone scapulaire ont été rasés avec une tondeuse électrique (NOVA), ensuite la zone rasée a été nettoyée avec de l’eau savonneuse. Vingt-quatre heures après le rasage, deux plaies de 1cm de diamètre et de 1 mm de profondeur ont été créées de part et d’autre de la colonne vertébrale des animaux à l’aide d’un dispositif, comportant une lame tranchante circulaire de 1cm de diamètre (MANJUNATHA et al., 2005 ; DELEAGE, 2011). Après la création de la plaie, sa surface a été mesurée par planimétrie directe. Pour ce faire, un papier millimétré transparent a été placé sur la plaie, puis le contour de celle-ci a été tracé sur le papier à l’aide d’un crayon à pointe fine. Ensuite, le nombre de carreaux a été compté pour déterminer la surface de la plaie (KARABINTA, 2010).
Les animaux ont ensuite été divisés en 2 lots, un lot témoin et un lot traité avec l’extrait. Les animaux du lot témoin ont été traités avec la crème de base et ceux du deuxième lot avec la crème contenant 10 % de l’extrait MI 308.
Étude de l’effet de l’extrait MI 308 sur l’hémostase
L’effet de l’extrait sur cette phase a été étudié en chronométrant la durée du saignement. Tout de suite après la création de la plaie, 10 mg crème de base ont été appliquées sur les plaies témoins et 10 mg de crème contenant 10 % de l’extrait sur les plaies des animaux du lot traité. Juste après l’application des crèmes, la durée du saignement a été chronométrée (OKOLI et al., 2007).
Étude de l’activité cicatrisante de l’extrait MI 308
Pour étudier l’effet de l’extrait MI 308, ses effets sur les phases inflammatoires, de bourgeonnement et de l’épithélialisation ont été observés tous les jours à la même heure, et les plaies ont été photographiées. La contraction des plaies a été évaluée en mesurant la surface par planimétrie directe.
Les plaies ont été nettoyées avec un coton imbibé d’eau pour ramollir la croûte avant de l’enlever. Ensuite la plaie a été séchée à l’aide d’un papier buvard. Puis leur état a été observé et noté. Après avoir nettoyé les plaies, 10 mg de crème de base ont été appliqués, en un léger massage circulaire, sur la plaie des animaux du lot témoin, et 10 mg de crème contenant 10% de l’extrait MI 308 ont été appliqués sur les plaies des animaux du deuxième lot (Le TOUZE et ROBERT, 1993).
Étude de l’effet de l’extrait MI 308 sur l’inflammation
Pour d’étudier l’effet de l’extrait sur l’inflammation, les signes de l’inflammation sur les berges des plaies ainsi qu’au niveau de la surface des plaies ont été observés. Le temps de leur apparition, ainsi que la durée de cette phase ont été notés pour les deux lots (DELEAGE, 2011).
Étude de l’effet de l’extrait MI 308 sur le bourgeonnement
Afin d’étudier l’effet de l’extrait sur la phase de bourgeonnement, l’aspect de la surface des plaies a été observé tous les jours, et le temps d’apparition du tissu de granulation au niveau de cette surface a été noté, et le nombre de bourgeons a été compté (SONI et SINGHAI, 2012).
Étude de l’effet de l’extrait MI 308 sur l’épithélialisation
L’effet de l’extrait MI 308 sur l’épithélialisation a été étudié en observant le temps d’apparition du tissu épithélial qui recouvre la plaie (SUBHASHINI et ARUNACHALAM, 2011).
Étude de l’effet de l’extrait MI 308 sur la fermeture des plaies
Pour étudier l’effet de l’extrait MI 308 sur la fermeture des plaies, leur surface a été mesurée par planimétrie directe, tous les jours à la même heure après les avoir nettoyées. Un papier millimétré transparent a été placé sur la surface de la plaie, puis le contour de celle-ci a été tracé sur le papier, et sa surface a été déterminée en comptant le nombre de carreaux dans le tracé (KARABINTA, 2011). Le temps de fermeture à 50 % Tc50 de la plaie a été observé et comparé avec celui des plaies témoins.
EXPRESSION ET ANALYSES DES RÉSULTATS
Les résultats obtenus ont été exprimés sous forme de moyenne ± écart-type réduit (m̅ ± 𝜎̅). Les moyennes ont été comparées entre elles, et le test « t » de Student a été utilisé pour comparer ces moyennes avec un degré de signification P < 0, 05.
Effet de l’extrait MI308 sur l’hémostase
L’application de la crème tout de suite après la création des plaies diminue la durée du saignement. Les plaies témoins où la crème de base a été appliquée saignent pendant 124 ± 6,5 contre 30 ± 2, 2 secondes chez les plaies traitées avec la crème contenant l’extrait MI 308 (P < 0,05), ce qui montre que l’extrait accélère l’hémostase.
Effet de l’extrait MI 308 sur l’inflammation
Vingt-quatre heures après leur création, toutes les plaies, aussi bien celles des témoins que celles des animaux traités avec l’extrait MI 308, présentent des signes d’inflammation caractérisées par un oedème et une rougeur au niveau de la berge, ainsi que de l’exsudat au niveau de leur surface (Figure 2).
Effet de l’extrait MI 308 sur le bourgeonnement
Après quatre jours de traitement, les plaies traitées avec l’extrait MI 308 présentent des bourgeons au niveau de leur surface. Au sixième jour, ces granulations comblent entièrement la surface des plaies traitées avec l’extrait et elles sont plus épaisses et plus abondantes par rapport à celles observées sur la surface des plaies témoins. Après 6 jours d’application, le nombre de bourgeons est égal à 48 ± 2, 3 sur les plaies traitées avec l’extrait, contre 22, 3 ± 1, 06 chez les plaies du lot témoin (P < 0,05) (Figure 3). Ces granulations n’apparaissent qu’au sixième jour sur les plaies traitées avec la crème de base. Ce qui montre que l’extrait accélère la formation du tissu de granulation.
Figure 3. État des plaies après 4 jours de traitement, la surface des plaies traitées avec la crème contenant 10 % de l’extrait MI 308 comblée de granulations (a) et début de formation de granulations à la surface des plaies témoins (b).
Effet de l’extrait MI 308 sur l’épithélialisation
Après sept jours de traitement avec l’extrait, un tissu épithélial fin, de couleur rose claire commence à apparaitre au niveau de la berge des plaies. Après 11 jours ce tissu couvre totalement la surface des plaies traitées avec l’extrait. L’épithélialisation des plaies traitées avec la crème de base prend 4 jours de retard par rapport à celle des plaies traitées avec l’extrait. Cela montre que l’extrait MI 308 accélère l’épithélialisation des plaies .
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Table des matières
LISTE DES TABLEAUX
LISTE DES SIGLES ET DES ABRÉVIATIONS
I. INTRODUCTION
II. MATERIÉLS ET MÉTHODES
A. PARTIE CHIMIQUE
1. Préparation de l’extrait
2. Criblage phytochimique
B. PARTIE PHARMACOLOGIQUE
1. Préparation de la crème de base
2. Préparation de la crème contenant 10 % d’extrait
3. Animaux d’expérimentation
4. Création des plaies
5. Étude de l’effet de l’extrait MI 308 sur l’hémostase
6. Etude de l’activité cicatrisante de l’extrait MI 308
a. Étude de l’effet de l’extrait MI 308 sur l’ inflammation
b. Étude de l’effet de l’extrait MI 308 sur le bourgeonnement
c. Étude de l’effet de l’extrait MI 308 sur l’épithélialisation
d. Étude de l’effet de l’extrait MI 308 sur la fermeture des plaies
C.EXPRESSIONS ET ANALYSES DES RÉSULTATS
III. RÉSULTATS
A. PARTIE CHIMIQUE
1. Rendement de l’extraction chimique
2. Résultats du criblage phytochimique
B. PARTIE PHARMACOLOGIQUE
1. Effet de l’extrait MI 308 sur l’hémostase
2. Effet de l’extrait MI 308 sur l’inflammation.
3. Effet de l’extrait MI 308 sur le bourgeonnement
4. Effet de l’extrait MI 308 sur l’épithélialisation
5. Effet de l’extrait MI 308 sur la fermeture des plaies
IV. DISCUSSION
CONCLUSION
BIBLIOGRAPHIE
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