Soutenance mémoire
Stades d’évolution de la syphilis
Diagnostic de la syphilis par automate ARCHITECT
ARCHITECT Syphilis TP: C’est un dosage immunologique microparticulaire par chimiluminescence (CMIA) pour la détection qualitative de l’anticorps dirigé contre le Treponema pallidum (TP) dans le sérum et le plasma humain
Principe: ARCHITECT Syphilis TP est un dosage immunologique en deux étapes pour la détection qualitative des anticorps anti- TP dans le sérum ou le plasma humain utilisant la technologie de dosage immunologique microparticulaire par chimiluminescence (CMIA) avec des protocoles de dosage flexibles, appelés Chemiflex. Dans un premier temps, l’échantillon, les microparticules recouvertes d’antigènes TP recombinants et le diluant de dosage sont mis en présence. Les anticorps anti- TP présents dans l’échantillon se lient aux microparticules recouvertes de TP. Après lavage, le conjugué d’anticorps anti- IgG et anti- IgM humains marqué à l’acridinium est ajouté dans un second temps. Après un autre cycle de lavage, les solutions de pré activation et d’activation sont ajoutées au mélange réactionnel.
La réaction chimiluminescence qui en résulte est mesurée en unité relative de lumière (URL). Il existe une relation directe entre la quantité d’anticorps anti-TP présent dans l’échantillon et le nombre d’URL détecté par le système optique ARCHITECT i.
La présence ou l’absence d’anticorps anti-TP dans l’échantillon est déterminée en comparant le signal chimiluminescent dans la réaction au signal de la valeur seuil déterminé lors d’une calibration ARCHITECT Syphilis TP antérieure. Si le signal chimiluminescent de l’échantillon est supérieur ou égal au signal de la valeur seuil, l’échantillon est considéré comme réactif pour les anticorps anti-TP.
Réactifs (commercialisés par Abbott laboratoires) : Microparticules : 1 flacon (6.6 ml pour le flacon 100 tests / 27.0 ml pour le flacon 500 tests) de microparticules recouvertes d’antigènes TP (E. coli, recombinants) dans du tampon MES. Conjugate : 1 flacon (5.9 ml pour le flacon 100 tests / 26.3 ml pour le flacon 500 tests) de conjuguée d’anticorps anti- IgG/anti- IgM humaines marquée à l’acridinium Assay diluant : 1 flacon (10 ml pour le flacon de 100 tests/ 52.2 ml pour le flacon de 500 tests) de diluant de dosage de syphilis TP
Fonctionnement de l’appareil : Avant d’effectuer le dosage, le fichier du dosage ARCHITECT Syphilis TP doit être installé sur l’ARCHITECT i system à partir de l’ARCHITECT i Assay CD-ROM (addition C).
Procédure du dosage
Avant de charger l’ARCHITECT Syphilis TP Reagent Kit sur l’analyseur pour la première fois, le flacon de microparticules doit être homogénéisé afin de
remettre en suspension les microparticules qui se sont déposées pendant le transport. Retourner le flacon de microparticules 30 fois Examiner le flacon pour s’assurer que les microparticules sont remises en suspension. placer un septum sur le flacon Charger l’ARCHITECT Syphilis TP Reagent Kit sur l’ARCHITECT i system Vérifier que tous les réactifs nécessaires à la réalisation du dosage sont présents S’assurer que chaque flacon de réactif est muni d’un septum Si nécessaire programmer une calibration Programmer les analyses Le volume minimum nécessaire requis dans le godet- échantillon est calculé par le système et imprimé sur le rapport liste des demandes 150µl pour le premier dosage ARCHITECT Syphilis TP plus 30µl pour chaque dosage supplémentaire En cas d’utilisation de tubes primaires ou aliquots, utiliser la jauge échantillon afin de s’assurer que le volume du sérum est suffisant Préparer le calibrateur et les contrôles Charger les échantillons Appuyer sur la touche LANCER
Calibration
Pour effectuer une calibration ARCHITECT Syphilis TP, analyser le calibrateur 1 en réplique de 3. Un échantillon de chaque contrôle ARCHITECT Syphilis TP doit ensuite être analysé afin de pouvoir évaluer la calibration du dosage. S’assurer que les valeurs des contrôles du dosage se trouvent dans les limites S/CO spécifiées dans la notice des contrôles. Le calibrateur 1 doit être chargé en position prioritaire Lorsque la calibration du dosage ARCHITECT Syphilis est acceptée et mémorisée, tous les échantillons qui suivent peuvent être analysés sans effectuer
une nouvelle calibration, sauf si un Kit de réactifs portant un nouveau numéro de lot est utilisé, ou la valeur des contrôles se situe en dehors des limites spécifiées.
Résultats
L’ARCHITECT i system calcule la valeur seuil (CO) à l’aide du signal chimiluminescent moyen (URL) de 3 répliques du calibrateur 1 et mémorise le résultat Calculs : Le dosage ARCHITECT Syphilis TP calcule un résultat à partir de la valeur seuil déterminée par le calcul suivant : La valeur seuil (CO) = moyenne des URL du calibrateur 1× 0.20
S/CO = URL de l’échantillon/valeur URL seuil
La valeur URL seuil est mémorisée pour chaque calibration de lot de réactifs.
Interprétation
Les échantillons dont la valeur S/CO est inférieure à 1.0 sont considérés comme non réactif par le dosage ARCHITECT syphilis TP
Les échantillons dont la valeur S/CO est supérieure à 1.0 sont considérés comme réactif par le dosage ARCHITECT syphilis TP
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Guide du mémoire de fin d’études avec la catégorie Syphilis congénitale |
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Table des matières
ABREVIATIONS
Introduction
Partie I : ETUDE BIBLIOGRAPHIQUE
1-Histoire de la syphilis
2-L’agent étiologique
2-1- classification
2-2- aspect
2-3- morphologie
2-3- structure antigénique de Treponema pallidum
4-Stades d’évolution de la syphilis
4-1- La syphilis primaire
4-2- La syphilis secondaire
4-3- La syphilis latente
4-4- La syphilis tertiaire
5-Neurosyphilis
6-Syphilis congénitale
7-Mode de transmission
7-1- contact sexuel
ABREVIATIONS
7-2- transmission materno-fœtal
7-3- toxicomanies
7-4- autres modes de contamination
8-Diagnostic de la syphilis
8-1- diagnostic direct
8-1-1- Examen au microscope à fond noir
8-1-2- Immunofluorescence
8-1-3- PCR
8-2- Diagnostic indirect
8-2-1 VDRL
8-2-2- TPHA
8-2-3- FTA
8-2-4- Test de Nelson
8-2-5- ELISA
8-2-6- Western Blot
9-profil sérologique en fonction de la syphilis
10-Interprétation des tests VDRL et TPHA
11-Traitement de la syphilis
12-Cinétique des anticorps
13- Prophylaxie
MATERIELS ET METHODES
1- Introduction
2- Lieu de stage
3- La population étudiée
4- Technique de diagnostic
4-1- Diagnostic de la syphilis par l’automate ARCHITECT
4-1-1- Principe
4-1-2- Réactifs
4-1-3- Fonctionnement de l’appareil
4-1-4- Procédure de dosage
4-1-5- Calibration
4-1-6- Résultats
4-7-1- Interprétation
4-2- Deux tests manuels V.D.R.L et TPHA
4-2-1- Test Venereal Disease Research Laboratory charbon
a- Principe
b- Réactifs de la VDRL
c- Matériel utilisé
d- Méthode
e- Lecture des résultats
4-2-2- Test Treponema Pallidum Hemagglutinations Assay
a- Principe
b- Matériel
c- Réactifs de la TPHA
d- Méthode
1- Méthode quantitative
e- Adsorption non spécifique
2- Méthode qualitative
Discussion
Conclusion
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