Soutenance mémoire
INTRODUCTION
L’hépatite B est une infection virale qui s’attaque au foie et peut entraîner une affection aiguë comme une affection chronique de cet organe. L’infection par le virus de l’hépatite B (VHB) est un problème majeur de santé publique [7, 13, 28] avec environ 257 millions de porteurs chroniques de ce virus dans le monde [22]. On distingue des régions à forte prévalence de l’antigène de surface du virus de l’hépatite B (AgHBs) (Afrique, Asie du Sud-Est), des régions de prévalence intermédiaire (Europe de l’Est, Afrique du Nord, Grèce, Japon) et des régions de prévalence faible (Europe du Nord et Etats-Unis d’Amérique) où respectivement 5 à 10 %, 2 à 5 % et moins de 2 % de la population générale est porteuse chronique de l’AgHBs [31]. Le VHB est très contagieux, en plus des autres voies de transmission (sexuelle, materno-fœtale et intra-familiale non sexuelle), il peut être transmis par la transfusion sanguine surtout dans les pays en développement. En Afrique subsaharienne, 12,5 % des patients transfusés présentent un risque d’hépatite post- transfusionnelle [19]. Pour pallier cela, il faut une sécurité transfusionnelle qui demeure depuis 2001 l’une des priorités des programmes de l’Organisation Mondiale de la Santé (OMS) en Afrique [33]. Cette sécurité biologique repose sur la maîtrise du risque immunologique et de la réduction des infections transmissibles par voie sanguine [29]. Parmi les stratégies à mettre en œuvre, il faut un dépistage des agents infectieux transmissibles par transfusion de sang et ses dérivés dont le VHB. Malgré les efforts réalisés pour sécuriser le don de sang dans les pays avec peu de ressources, la prévalence de l’infection au virus de l’hépatite B chez les donneurs de sang se situe entre 3 et 22 % [20]. Depuis longtemps, la recherche qualitative de l’AgHBs par la méthode immunochromatographique est utilisée pour le diagnostic d’infection par le VHB [8]. Actuellement le dépistage du VHB dans les dons de sang a été considérablement amélioré avec l’avènement des automates basés sur la méthode immunologique microparticulaire par chimiluminescence [14], des tests moléculaires qui sont encore plus sensibles (polymerase chain reaction). Actuellement, des kits sont commercialisés pour la recherche de l’AgHBs tel que le kit Elecsys HBsAg II (Roche Diagnostic) qui utilise des anticorps monoclonaux et polyclonaux permettant une amélioration de la reconnaissance de l’AgHBs et des mutants AgHBs qui portent des substitutions aminoacidiques sur la séquence de l’AgHBs qui empêchent sa détection par les tests sérologiques usuels (on parle d’hépatite B « occulte ») [24]. Dans les laboratoires et les banques de sang des régions, les tests rapides sont le plus souvent utilisés ; les performances de ces tests doivent faire l’objet d’évaluation fréquente pour garantir la sécurité transfusionnelle. C’est dans ce contexte que ce travail a été entrepris avec comme objectif général d’évaluer les performances du test de diagnostic rapide HBsAg NOVA utilisé pour rechercher l’antigène de surface du virus de l’hépatite B chez les donneurs de sang bénévoles lors des stratégies mobiles de collecte de sang au Centre Hospitalier National Mathlaboul Fawzaini de Touba. Le document sera articulé autour de deux parties. La première partie sera consacrée à la synthèse bibliographique où nous parlerons de la classification, de la structure, de l’épidémiologie, de l’histoire naturelle de l’infection par le virus, du diagnostic, du traitement et de la prévention du VHB. Dans la deuxième partie, nous donnerons les objectifs de l’étude ainsi que la méthodologie suivie ; enfin nous présenterons et discuterons les différents résultats obtenus au cours de cette étude.
Répartition des cas positifs à l’AgHBs
Au niveau de la banque de sang du Centre Hospitalier National Mathlaboul Fawzaini les 211 échantillons ont été testés pour la recherche de l’AgHBs par immuno-chromatographie avec le test de diagnostic rapide HBsAg NOVA. Les résultats obtenus sont les suivants : 25 cas de séropositivité et 186 cas de séronégativité. Parmi les 25 donneurs séropositifs à l’AgHBs, 23 sont de sexe masculin soit 92 %. A la fin de l’étude, notre échantillon a été constitué de 111 donneurs choisis en respectant un pas d’échantillonnage de deux (2) parmi les 211 de départ. Les donneurs de sexe masculin ont été au nombre de 75 soit 67,57 % et ceux de sexe féminin étaient au nombre de 36 soit 32,43 %. Le sex-ratio Homme/Femme a été de 2,08. La moyenne d’âge des donneurs constituant notre échantillon final a été de 27, 35 ans (extrêmes 18 – 56 ans). Chez les donneurs hommes, la moyenne d’âge a été de 26,98 ans (extrêmes 18 – 56 ans) et chez les donneurs femmes, la moyenne d’âge a été de 28,11 ans (extrêmes 18 – 53 ans).
DISCUSSION
De nombreux tests rapides à l’AgHBs sont disponibles dans le commerce dans le monde entier. Selon le rapport d’évaluation du Département de la sécurité du sang et de la technologie clinique du sang de l’Organisation Mondiale de la Santé, la plupart des tests étaient des tests immunochromatographiques avec une sensibilité de 98 à 100 % et une spécificité de 95 à 100 % [35]. Cette étude avait comme objectif d’évaluer les performances du test NOVA utilisé pour le dépistage des donneurs de sang au CHN Mathlaboul Fawzaini de Touba. A cet effet, nous avons utilisé comme tests de référence l’Elecsys HBsAg II de Cobas et le test HBsAg Qualitative II d’Architect dont le principe du dosage repose sur la méthode microparticulaire chimiluminescente. Les résultats de l’étude ont montré par rapport à l’Elecsys une sensibilité et une spécificité du test NOVA de 89,47 % et 100 % respectivement ; les valeurs prédictives positive et négative étaient respectivement de 100 % et 97,87 %. Par contre la sensibilité et la spécificité du test par rapport à celui d’Architect étaient respectivement de 80,95 % et 100 % ; les valeurs prédictives positive et négative ont donné des taux de 100 % et de 73,33 % respectivement. Ces résultats peuvent être comparés avec les résultats d’études antérieures menées sur des tests de diagnostic rapide dont les principes sont similaires. Ainsi, une étude menée en 2008 par Yu-Huei L et al au Centre de sang de la Croix Rouge de Beijing en Chine chez des donneurs de sang utilisant le Determine HBsAg dont la méthode est basée sur un dosage immunochromatographique a donné une sensibilité de 87,3 % et une excellente spécificité de 100 % [36], ce qui corrobore ainsi les résultats du test NOVA obtenus dans notre étude. Dans une autre étude menée en 2008 par Randrianirina F et al à Antananarivo au Madagascar pour l’évaluation de quatre tests rapides (Determine HBsAg, Virucheck HBsAg, Cypress HBsAg Dipstick et Hexagon HBsAg) dont les principes reposent sur l’immunochromatographie, les résultats ont donné des sensibilités et des VPP supérieures à 95 %, des spécificités et des VPN dépassant 96 % pour l’ensemble des tests [26]. En comparant ces résultats avec ceux obtenus dans notre étude avec comme référence l’Elecsys, nous constatons que les sensibilités diffèrent, elles sont beaucoup plus faibles dans notre étude mais les spécificités, les VPP et les VPN corroborent nos résultats. De telles différences de sensibilité pourraient être expliquées par le choix des anticorps qui sont fixés sur les membranes de nitrocellulose ou à l’existence de variants du virus donnant des séquences qui ne sont pas reconnues par les anticorps utilisés dans un test [34]. Une étude évaluative de 5 tests de dépistage de l’AgHBs (Global, Diaspot, Ind, Acon, Exact) dont les principes sont basés sur l’immunochromatographie a été effectuée en 2018 par Afolabi A. Y et al au Nigéria ; les résultats de cette étude ont montré des valeurs de sensibilité comprises entre 97,5% et 98,9 % pour les cinq tests et des valeurs de spécificité variant entre 80 % et 90 % [1]. Lorsque nous comparons ces valeurs de sensibilité avec celles obtenues dans l’étude que nous avons menée, elles sont largement supérieures mais les spécificités sont plus faibles. Les VPP (entre 88 % et 89 %) des cinq kits [1] sont plus faibles que celles du test NOVA tandis que les VPN (entre 80 % et 90 %) sont plus élevées que celles obtenues dans notre étude lorsque le test d’Abbott est pris comme référence. Lorsque nous comparons les résultats du test NOVA obtenus avec l’Elecsys HBsAg II de Cobas e-411 et l’HBsAg Qualitative II d’Architect i 1000 SR, nous constatons que la valeur de la sensibilité et celle de la valeur prédictive négative sont beaucoup plus faibles avec l’Architect qu’avec le Cobas e-411. De tels résultats pourraient nous amener à comparer la sensibilité du Cobas e-411 à celle d’Architect. Un taux élevé (12,5 %) de résultats discordants a été obtenu avec l’Architect. Pour la résolution des résultats discordants, il est important d’envisager la recherche d’autres marqueurs du VHB ou recourir à l’étude moléculaire des différents échantillons concernés. Une étude multicentrique regroupant 9 laboratoires en Thaïlande, Corée du Sud et Singapour menée en 2010 par Louisirirotchanakul S et al a comparé les performances du test Elecsys HBsAg II et du test d’Architect dont les principes consistent en un dosage par chimiluminescence. Le test Elecsys HBsAg II avait démontré une sensibilité et une spécificité équivalentes à celles du test d’Architect. Cependant, le test Elecsys HBsAg II a reconnu un échantillon de mutants natifs (L94S, L97V, L98V, T123A) non détecté par le test Architect HBsAg [17].
CONCLUSION
Les résultats obtenus durant cette étude transversale évaluative indiquent que la sensibilité et la spécificité du test NOVA varient selon l’appareil et la méthode utilisés. Les méthodes chimiluminescentes étant beaucoup plus sensibles et plus spécifiques que les méthodes immuno-chromatographiques ; dès lors, elles devraient être utilisées de manière générale comme référence dans le dépistage des maladies infectieuses lors du don de sang et en particulier lors de la recherche du VHB à la place du test rapide. Cependant, le test NOVA, en raison de ses performances, de sa simplicité, de sa rapidité d’exécution, de son moindre coût, peut convenir au dépistage de l’AgHBs. Néanmoins, il peut exister un risque résiduel d’hépatite B associée à la transfusion ; ainsi, pour réduire ce risque, nous formulons ces recommandations à l’endroit des décideurs et de la banque de sang du CHN Mathlaboul fawzaini de Touba. A l’endroit des décideurs :
Mettre en place un système de contrôle des réactifs commercialisés dans le pays ;
Faire l’audit et exiger des agréments aux entreprises locales fournissant les TDR ;
Assurer le contrôle et la validation des TDR par la direction des laboratoires ;
Impliquer le centre national de transfusion sanguine dans le choix des tests devant servir au dépistage des poches de sang dans les différentes banques de sang du pays ; A l’endroit de la banque de sang du CHN Mathlaboul fawzaini de Touba :
Utiliser comme outil de dépistage des donneurs de sang un automate dont le principe reposera sur la chimiluminescence à la place des tests de diagnostic rapides ;
Effectuer des contrôles de qualité internes pour chaque lot de réactif reçu ;
Effectuer des contrôles de qualité externes en collaboration avec le centre national de transfusion sanguine ;
Orienter les donneurs présentant une séropositivité au VHB vers le programme de lutte contre les hépatites pour un meilleur suivi et une prise en charge adéquate si nécessaire ;
Inclure la validation moléculaire des poches de sang pour réduire au maximum le risque d’infection.
En perspectives, une étude moléculaire devrait être effectuée sur tous les sérums qui ont donné une discordance avec les deux méthodes pour pouvoir déterminer les génotypes et les mutants s’il y’en a. Pour la réalisation de la cartographie de l’infection chronique par le VHB, l’étude devrait être étendue sur un échantillon beaucoup plus large dans la population locale pour pouvoir déterminer les génotypes les plus représentés.
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Table des matières
INTRODUCTION
I. REVUE DOCUMENTAIRE
1. Classification et structure du VHB
1.1. Classification
1.2. Structure
1.2.1. La particule virale
1.2.2. Organisation génomique
2. Epidémiologie du VHB
2.1. Répartition géographique
2.2. Modes de transmission
3. Histoire naturelle de l’infection par le VHB
4. Diagnostic du VHB
4.1. Diagnostic sérologique
4.2. Diagnostic moléculaire
5. Traitement et prévention du VHB
5.1. Traitement
5.2. Prévention
II. OBJECTIFS DE L’ETUDE
1. Objectif principal
2. Objectifs spécifiques
III. MATERIEL ET METHODES
1. Cadre de l’étude et type d’étude
2. Choix des donneurs bénévoles de sang
2.1. Critères d’inclusion
2.2. Critères de non inclusion
3. Prélèvements
4. Recherche des marqueurs du virus de l’hépatite B
4.1. Recherche de l’AgHBs par immuno-chromatographie
4.2. Recherche de l’AgHBs par électro-chimiluminescence
5. Analyses statistiques
IV. RESULTATS
1. Echantillonnage des donneurs
2. Répartition des cas positifs à l’AgHBs
3. Méthode immuno-chromatographie
4. Méthode électro-chimiluminescence
4.1. Résultats obtenus avec l’automate Cobas e-411
4.2. Résultats obtenus avec l’automate Architect i 1000 SR
V. DISCUSSION
CONCLUSION
REFERENCES
RESUME
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