Méthode de dosage d’histamine

Méthodes de dosage d’histamine

L’histamine est une amine biogène provenant de la dégradation de l’histidine par décarboxylation dans la chair du poisson. Elle est très toxique. Sa présence à des teneurs élevées dans les produits halieutiques est susceptible de provoquer des problèmes sanitaires graves (intoxication, allergies, troubles respiratoires, vomissements, diarrhées, etc.) Nombreuses sont les insuffisances observées dans les méthodes actuelles (instabilité, interférences, longue durée et coût très élevé) de dosage de l’histamine dans les produits alimentaires (produits halieutiques et dérivés, fromages, etc.) et les liquides physiologiques (sang, plasma, urine, larmes, etc.). Le dosage de ce paramètre représente un enjeu sanitaire et économique très important. [6]

Depuis sa découverte, diverses méthodes ont été utilisées pour son dosage dans différentes matrices, on note la méthode de référence utilisée au niveau de notre travail qui est l’HPLC, et la méthode normalisé européenne l’AOAC 1. Méthode AOAC C’est une méthode de référence pour les Etats-Unis et le Codex Alimentarius. L’histamine est extraite de l’échantillon avec une solution de méthanol à 75%. L’extrait méthanolique est passé dans une colonne échangeuse d’ions puis l’histamine éluée est complexée avec OPA, qui est un dérivé fluorescent. Le résultat est mesuré par fluorimétrie. Avantages Cette méthode est très précise, sensible et reproductible. Inconvénients Cette méthode est longue à mettre en oeuvre et elle doit être effectuée par des analystes expérimentés. 2.

Chromatographie Liquide Haute Performance (HPLC)

Méthode de référence pour l’Union Européenne. Comme toutes les chromatographies, cette méthode vise à séparer les constituants d’un mélange et repose sur l’utilisation d’une phase mobile et d’une phase stationnaire. La HPLC repose sur la circulation d’un fluide (phase mobile) dans une colonne (phase stationnaire). Les amines biogènes sont extraites de l’échantillon à tester puis on pratique une dérivatisation de ces amines (avant ou après passage dans la colonne). La solution à tester est ensuite injectée dans la colonne om les constituants vont être retenus inégalement en fonction de leur taille et de leur composition. Ils vont donc mettre plus ou moins de temps à la parcourir. Le fluide est récupéré à la sortie de la colonne. On peut alors déterminer la quantité et le type de constituants dans le fluide (car ils arrivent les uns après les autres dans le récipient) à l’aide de méthodes de mesure précises, en général par fluorimétrie. Les résultats sont exprimés en mg d’histamine/kg.

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Table des matières

Liste des abréviations
Introduction
Chapitre I Présentation de l’organisme d’accueil AAM
Chapitre II Espèces utilisées au niveau des analyses
Les Anchois
Sardines
Statistiques
Zone Atlantique
Zone méditerranéenne
Evolution des exportations des produits de la mer en Maroc
Dangers liés à l’intoxication histaminique
Chapitre 1 Méthodes de dosage d’histamine
Méthode AOAC
Chromatographie Liquide Haute Performance (HPLC)
Chapitre 2 Méthode de dosage d’histamine utilisée au sein du laboratoire
Méthode spectrofluorimétrique de Lerke et Bell
Objet et domaine d’application
Réactifs
Appareillage
Préparation de l’échantillon
Dosage
Taux d’histamine dans les Conserve de Sardine
Taux d’histamine dans les semi–conserves d’anchois
Conclusion générale
Références bibliographiques