Soutenance mémoire
Matériel biologique
Le matériel biologique de base retenu est le rat mâle de la souche Wistar provenant de l‟institut pasteur d‟Alger. Les rats sont des mammifères nocturnes de l‟ordre des rongeurs. La puberté survient entre 50 et 60 jours après la naissance, et ceci dans les deux sexes. L‟espérance de vie moyenne d‟un rat se situe entre 02½ ans et 03 ans, selon la souche d‟appartenance, les conditions environnementales et autres facteurs(Baker et al., 1980). Après une période d’adaptation de trois semaines, 56 rats mâles ont été sélectionnés. Au début de l’expérimentation ces rats pesaient entre (200±20) grammes.
Conditions d’élevage
Les rats sont élevés dans des cages translucides en polyéthylène.Celles-ci sont tapissées d‟une litière composée de copeaux de bois. La chambre contrôlée, pour la photopériode : lumière de 12/h cycle jour / nuit.Les cages sont nettoyées et la litière changée une fois tous les deux jours. Les 56 rats sont acclimatés deux mois aux conditions de l‟animalerie, à une température moyenne de 25 ±2°C et une hygrométrie de 50%. La nourriture des rats leur est présentée sous forme de bâtonnets, composées de mais, de son, de remoulage de blé, soja, CMV (Sarl la production locale aliment souris et rats Bouzaréah – Alger). Pour ce qui est de l‟eau de boisson, elle leur est présentée dans des biberons ad libitum.
Lotissement des animaux
Après une période d‟adaptation de trois semaines, nous avons sélectionné 56 rats en fonction de leurs poids (compris approximativement entre 200 ± 20grammes) que nous avons divisé une première fois en 4 lots expérimentaux de 14 rats chacun : lot control (C) n=14 rats, lot diabétique (D) n=14, lot stressé (S) n=14 et lot diabétique stressé (DS) n=14. Chaque lot initial fut divisé endeux sous-groupes de 07 rats chacun. Dans chaque lot de 14 rats, un sousgroupe de 07 rats reçoit par gavage gastrique 1 ml/kg de solution saline de Nacl 0.9 % (véhicule) et l‟autre sous groupe de07 rats, reçoitégalement par gavage gastrique une dose de 100 mg/kg d‟hespéridine (antioxydant) dissoute dans la même solution de Nacl 0.9 %.
Méthodes
Procédure expérimentale
Administration de la streptozotocine
La streptozotocine (STZ) est une substance chimique soluble dans l‟eau, le sérum physiologiqueet les solvants organiques. La streptozotocine dont le poids moléculaire est de 265,2 Da, à été isolée en 1956 à partir de streptomyces et utilisée pour la première fois en 1967. Elle est courammentutilisée sur des modèles animaux pour l‟étude du diabète (Frodeet al.,2008) (Figure 05). Elle est constituée d‟un résidu de glucose auquel se lie un carbone (2), un résidu nitro-urée méthylé. In vivo, sa demi-vie est de 5 à 15 minutes. Il est possible que l‟entité glucidique dela molécule facilite son internalisation viales transporteurs GLUT2 membranaires des endocrinocytes β pancréatiques (White FR.,1963). L‟induction du diabète des lots de rats DH et DS se fait par une seule injection intra Péritonéale (Inj. IP) de STZ [Sigma ST Lowis, Mo] à la dose de 60 mg/kg de poids corporel, soit un volume de 1 ml/kg. La streptozotocineest préparée extemporanément dans une solution de tampon 0,1 M de citrate de sodium (pH 4,5). Les lots C et S reçoivent une seule injection IP du tampon citrate.
Administration de la solution glucosée
Afin de corriger l‟hypoglycémie induite par la libération d‟insuline dans le sang, suite à la destruction massive des cellules β pancréatiques par la STZ,l‟eaudes biberons a été remplacée par une solution glucosée isotonique à 5% pour une durée de 48 heures. L‟hyperglycémie apparait 72 heures après l‟injection. La détectionde glucose dans les urines des rats se fait à l‟aide de bandelettes réactives de type BILI LABSTIX®,paramètre biologique assez important pour le diagnostic de la maladie diabétique.
Traitement par l’hespéridine
Présentation de l’hespéridine
L‟hespéridine [Sigma,approx. 80%] est un flavanoneglycosylé (glycoside) constituéd‟unflavanone appelé hespéritineet d‟un disaccharide nommé rutinose. C‟est une substancesolide peu hydrosoluble. Elle est cependant plus hydrosoluble que son aglycone, l‟hespéritine. La moléculaire d‟hespéridine est composée de 77 atomes (C28H34O15), dont 28 carbones, 34 hydrogènes et 15 oxygènes.Son poids moléculaire est de 610.57 Da, et son disaccharide le rutinose, est composé de glucose et de rhamnose (6-désoxy-L-mannose) (Parketal., 2008).
La pharmaco-cinétiquede l‟hespéridine est mal connue et son absorption par l‟épithéliumintestinal sous forme de glycoside reste imprécise.(Kobayashiet al., 2008). La génine (aglycone) correspondant à l‟hespéritineest détectée dans le sérum après son ingestion etpourrait être formée avant l‟absorption dont elle pourrait subir une glucoronidation soit au niveau de la paroi intestinale soit dans le foie (Nielsen et al.,2006).
Administration de l’hespéridine
L‟hespéridine est l‟antioxydant retenu pour le traitement des rats. Il se présente sous forme de poudre jaunâtre. La quantité d‟hespéridine indispensable à la préparation de la solution est de 50 mg/ kg de poids corporel, dans ces conditions la balance de précision est plus que nécessaire. Les doses quantifiées sontmis dans des tubes à Eppendorf pour être dissoutes par la suite dans une solution saline à 0.9 % à raison de 01 ml par kg de poids corporel. Il est nécessaire de bien agiter les tubes, jusqu’à obtention d’une solutionblanche semi aqueuseavant son administration. Le traitementpar l‟antioxydant ou par le véhicule (NaCl)pour les contrôles se fera par gavageet débutera 72 heures après l‟induction du diabète soit le 4éme jour et ceci durant21 Jours, ce qui correspond exactement à la durée du traitement.
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Table des matières
1 INTRODUCTION
2 MATERIEL ET METHODES
2.1Matériel biologique
2.1.1 Conditions d‟élevage
2.1.2 Lotissement des animaux
2.2 Méthodes
2.2.1 Procédure expérimentale
2.2.1.1 Administration de la Streptozotocine
2.2.1.2 Administration de la solution glucosée
2.2.3 Traitement par un l‟hespéridine
2.2.3.1 Présentation de l‟hespéridine
2.2.3.2 Administration de l‟hespéridine
2.2.4 Tests Comportementaux
2.2.4.1 Test du champ ouvert (Open Field ; OF)
2.2.4.2 Test du labyrinthe en croix surélevé (Elevated plus maze)
2.2.4.3 Application du stress Water Avoidence (WAS)
2.2.5 Prélèvements
2.2.5.1 Prélèvement sanguin
2.2.5.2 Prélèvement des organes
2.2.6 Etude des paramètres biochimiques
2.2.7 Etude statistique
3 RESULTATS
3.1 Variation du comportement
3.1.1 Labyrinthe en croix surélevé
3.1.2 Le champ ouvert
3.2 Variation glycémique
3.3 Variation pondérale
3.4 Variation du poids des organes
3.4.1 Le cerveau
3.4.2 Le foie
3.4.3 Le pancréas
3.4.4 Les glandes surrénales
3.4.5 Les testicules
4 DISCUSSION
5 CONCLUSION ET PERSPECTIVES
REFERENCES BIBLIOGRAPHIQUES
PUBLICATION
