Soutenance mémoire
La microbiologie médicale s’intéresse tout particulièrement aux microorganismes pathogènes, responsables de maladies infectieuses. Un des principaux rôles du bactériologiste consiste à aider le clinicien dans le choix d’une thérapeutique, en testant la sensibilité à divers antibactériens (antifongiques et antibiotiques) d’un micro-organisme en présence d’un antibiotique ou d’un antifongique et, d’un point de vue plus pratique, de prédire la réussite ou l’échec d’un traitement. Mais au préalable, il faut assurer une bonne qualité de ces médicaments. Or, le contrôle du marché pharmaceutique est un véritable problème pour les pays en voie de développement et tous signalent l’existence de circuits d’approvisionnement illicites. Le marché parallèle est le lieu de prédilection pour écouler les médicaments non conformes.
GENERALITES SUR LES ANTIBACTERIENS
DEFINITIONS
Asepsie
Un milieu est dit septique lorsqu’il contient des microorganismes : il est dit aseptique dans le cas contraire. Des conditions rigoureuses d’asepsie sont requises en milieu hospitalier dans les services dits à haut risque (réanimation, chirurgie) [22]. Dans les salles d’opération, on cherche par tous les moyens possibles à éviter la contamination du champ opératoire (tenues spéciales du personnel, stérilisation du matériel, préparation du malade).
Désinfection
La désinfection est définie comme une opération, au résultat momentané, permettant d’éliminer ou de tuer les microorganismes et/ou les virus indésirables portés par des milieux inertes contaminés, en fonction des objectifs fixés. Le résultat de cette opération est limité aux microorganismes présents au moment de l’opération [2]. L’usage du terme « décontamination » comme synonyme de « désinfection » est prohibé, car les décontaminants s’utilisent sur du matériel souillé (matériel médicochirurgical, médico-secouriste ….) contrairement aux désinfectants qui s’utilisent sur des surfaces inertes.
Décontaminants
La décontamination est définie comme une opération, au résultat momentané permettant d’éliminer, ou d’inhiber les microorganismes indésirables en fonction des objectifs fixés. Le résultat de cette opération est limité aux microorganismes présents au moment de l’opération ; les termes « de vie », « de mort » et de « tuer » appliqués aux microorganismes, se réfèrent à la capacité ou à l’incapacité définitive de réplication du matériel génétique des microorganismes.
La stérilisation
La stérilisation est l’opération qui a pour but de tuer les microorganismes contenus dans une préparation. Le matériel traité est dit stérile lorsque le résultat est acquis, c’est-à-dire lorsque aucun microorganisme n’est revivifiable ou n’est capable de se développer [4]. Le résultat de la stérilisation doit être permanent, ce qui requiert un emballage imperméable à toute recontamination avec une tolérance de non-stérilité de 10-6 (un objet non rigoureusement stérile sur un million). Les difficultés d’éviter la recontamination conduisent à définir une date de péremption. La mort ou l’inactivation pour une bactérie est bien une perte irréversible de son pouvoir de reproduction (croissance et division). Les agents utilisés pour assurer la stérilisation sont :
-physiques : température (chaleur sèche – chaleur humide), les radiations
– chimiques .
Définitions complémentaires
● Bactéricide
Produit ou procédé ayant la propriété de tuer les bactéries dans des conditions définies.
● Bactériostase
C’est l’état d’une population bactérienne dont la multiplication est momentanément inhibée.
● Bactériostatique
C’est un produit ou un procédé ayant la propriété d’inhiber momentanément des bactéries dans des conditions définies.
● Antibactérien
Ceci qualifie un produit ou un procédé dont on ne précise pas si son activité est bactéricide ou bactériostatique.
● Fongicide
C’est un produit ou un procédé ayant la propriété de tuer les champignons, y compris leurs spores dans des conditions à préciser.
● Fongistase
Etat d’une population dont le développement est momentanément inhibé.
● Fongistatique
Produit ou procédé ayant la propriété d’inhiber momentanément le développement des champignons dans des conditions définies.
● Antifongique
Qualifie un produit ou un procédé dont on ne précise pas si son activité est fongicide ou fongistatique.
PRINCIPALES MOLECULES D’ANTIBACTERIENS
LES ANTIBIOTIQUES
Les β-lactamines
Mécanismes d’action
Ils agissent sur la paroi bactérienne en inhibant la synthèse du peptidoglycane conduisant à un effet bactériostatique. Le peptidoglycane est directement exposé chez les germes Gram (+) mais protégé chez les germes Gram (-) par une membrane lipidique supplémentaire empêchant l’action directe des antibiotiques.
Caractères physiques
L’amoxicilline c’est une poudre blanche à sensiblement blanche, très hygroscopique, très soluble dans l’eau, assez soluble dans l’éthanol, très peu soluble dans l’acétone et pratiquement insoluble dans l’éther. Elle se conserve dans un récipient étanche à l’abri de la lumière et à une température ne dépassant pas 25°C.
Les aminosides
Mécanisme d’action
Les aminosides agissent sur la synthèse protéique en se fixant sur la fraction 30S du ribosome bactérien au niveau de protéines particulières. Il s’en suit une altération ou une inhibition complète de la synthèse protéique. La fixation au ribosome se traduit aussi par une augmentation du transfert à travers la membrane cytoplasmique qui se trouve désorganisée et dont le fonctionnement est altéré. Cet effet et d’autres mécanismes encore imprécis expliquent l’action bactéricide de la plupart des aminosides.
Caractères physiques
Gentamicine sulfate : la gentamicine est le sulfate des fractions C1, C2, C1a de la gentamicine produite au cours de la croissance de Micromonospora purpurea. C’est une poudre blanche ou couleur crème inodore, soluble dans l’eau, pratiquement insoluble dans l’éthanol, éther R et chloroforme R. La poudre se conserve dans un récipient étanche à l’abri de la lumière.
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Table des matières
INTRODUCTION
CHAPITRE I : GENERALITES SUR LES ANTIBACTERIENS
1 – DEFINITION
1.1. Asepsie
1.2. Désinfection
1.3. Décontaminants
1.4. La stérilisation
1.5. Définitions complementaires
2 – PRINCIPALES MOLECULES D’ANTIBACTERIENS
2.1. Les antibiotiques
2.1.1. Les bêta-lactamines
2.1.2. Les aminosides
2.1.3. Les cyclines
2.1.4. Les macrolides
2.1.5. Sulfaméthoxazole + Triméthoprime
2.2. Les Antifongiques
2.2.1. Les polyènes
2.2.2. Fluorocytosine
2.2.3. Imidazolés et triazolés
2.2.4. Griséofulvine
CHAPITRE II : METHODES DE DOSAGE
1 – DOSAGES MICROBIOLOGIQUES
1.1. Diffusion sur gélose
1.2. Turbidimétrie
2 – DOSAGES IMMUNOLOGIQUES
3 – CARACTERISATIONS PHYSICO-CHIMIQUES
CHAPITRE III : QUALITE DES MEDICAMENTS
1 – LES CRITERES DE QUALITE
1.1. L’identité
1.2. La pureté
1.3. L’innocuité
1.4. L’activité
1.5. L’acceptabilité
1.6. L’uniformité
1.7. La bio-disponibilité
1.8. La stabilité
1.9. La conservation ou conditionnement
CHAPITRE IV : PROCEDURES DE VALIDATION ET DEFINITIONS DE QUELQUES PARAMETRES DE VALIDATION
1 – LINEARITE OU DOMAINE D’ANALYSE
2 – LIMITE DE DETECTION
3 – PRECISIONS
4 – REPETABILITE ET REPRODUCTIBILITE
4.1. Répétabilité
4.2. Reproductibilite
5 – SPECIFICITE
6 – SENSIBILITE
7 – EXACTITUDE ET JUSTESSE
DEUXIEME PARTIE : TRAVAIL PERSONNEL
CHAPITRE I : CADRE D’ETUDE
CHAPITRE II : MATERIEL ET METHODE
1. – MATERIELS
1.1. Appareillage et verrerie
1.2. Réactifs et milieux de culture
1.3. Souches de référence
1.4. Antibactériens utilisés
2. – TESTS PREALABLES DE STERILITE ET D’EFFICACITE
2.1. Tests de stérilité
2.2. Tests d’efficacité
3. – METHODES DE DIFFUSION SUR GELOSE
3.1. Principe
3.2. Mode opératoire
3.3. Titrage
3.4. Expression des résultats
4. – APPLICATIONS
4.1. Tests préliminaires de stérilité et d’efficacité
4.2. Dosage des bêta-lactamines
4.3. Dosage des cyclines
4.4. Dosage des aminosides : gentamicine
4.5. Dosage des macrolides : érythromycine
4.6. Dosage des sulfamides et Triméthoprime : Cotrimoxazole
4.7. Dosage des antifongiques
5. – STANDARDISATION
CHAPITRE III : RESULTATS
1. – TESTS PREALABLES
1.1. Appareillage et verrerie
1.2. Tests d’efficacité
2. – RESULTATS DES ESSAIS PROPREMENT DITS
2.1. Dosage des antibiotiques
2.2. Dosage des antifongiques
3. – RESULTATS DE LA VALIDATION : EXPRESSION DES RESULTATS
CHAPITRE IV : DISCUSSION
CONCLUSION
BIBLIOGRAPHIE
