EVALUATION DES EFFETS NOCIFS DE L’ETHANOL ET UTILISATION DE SILYBUM MARIANUM

Identification de l’éthanol

Ethanol, alcool éthylique, alcool de grain, méthyl carbinol, hydrate d’éthyle et l’alcool de pomme de terre (Strohm, 2014), est un alcool aliphatique à 2 carbones de formule structurelle CH3CH2OH (Bekatorou, 2016). Dans des conditions ordinaires, l’éthanol est un liquide volatil, inflammable, clair et incolore, son odeur est agréable, familière et caractéristique (Logsdon, 2000). L’éthanol est un solvant polyvalent, miscible avec l’eau et avec plusieurs d’autres substances telles que les solvants organiques, les hydrocarbures aliphatiques légers, les chlorures aliphatiques et d’autres substances non polaires telles que les huiles essentielles (Bekatorou, 2016). Grace à ces nombreuses propriétés utiles, L’éthanol est utilisé par une gamme d’industries différentes. Il est utilisé comme produit intermédiaire par l’industrie chimique, pharmaceutique ou cosmétique. L’éthanol est utilisé dans les boissons alcoolisées, comme solvant, dans la fabrication des plastiques, des laques, des vernis et les plastifiants. Il est utilisé aussi dans les produits cosmétiques comme les parfums, les après-rasages et les eaux de Cologne. Il a également de nombreuses utilisations médicales et peut être trouvé dans des produits tels que les médicaments, comme un antiseptique dans la plupart des gels désinfectants antibactériens pour les mains, les bains de bouche et comme antidote à l’éthylène glycol ou au surdosage de méthanol (Strohm, 2014). La consommation des boissons alcoolisées considéré comme la principale source d’exposition de la population générale à l’éthanol, cependant, les expositions se produisent également par inhalation de vapeur d’éthanol et par absorption cutanée (sont les plus importantes en milieu professionnel) (Bevan et al., 2009).

La mobilité / concentration des spermatozoïdes

La concentration et les paramètres de la mobilité des spermatozoïdes ont été mesuré automatiquement par la méthode d’analyse de sperme assistée par ordinateur CASA en utilisant le Sperm Class Analysis (SCA®, Microptic, Barcelona, Espagne) version 6.2.0.0. 5µl de sperm diluer a une température de 37 °C a été mis dans une chambre de la lame GoldCyto préchauffée et mis sous microscope Nicon Eclipse (Nikon E200-LED) en utilisant objective x4 négative à contraste de phase combiné à un contraste condenseur de phase, le microscope intégré avec une caméra BASLER acA780-75gc. Le module Mobilité/concentration de sperm class analysis nous permettons de déterminer les paramètres suivants : concentration, mobilité totale, mobilité progressive, et les paramètres cinétiques (VCL, VSL, VAP, BCF et ALH).

Dosage de l’activité enzymatique du Glutathion Peroxydase (GPx)

Principe : l’activité enzymatique du glutathion peroxydase (GPx) testiculaire, épididymaire, hépatique et rénal a été mesurée par la méthode de Flohe & Gunzler, (1984). Cette méthode est basée sur la réduction de peroxyde d’hydrogène (H2O2) en présence de glutathion réduit (GSH), ce dernier est transformé en (GSSG) sous l’influence de la GPx selon la réaction suivante : H2O2 + 2GSH GSSG + 2H2O Préparation de l’homogénat : 100 mg de chaque tissu ont été mis en présence de 1 mL d’une solution TBS (Tris 50 mM, NaCl 150 mM, pH 7.4), puis ont été broyés à froid (4 °C) en utilisant un broyeur pendant 30 secondes pour obtenir un homogénat.
 Prélever 0,2 ml de l’homogénat.
 Ajouter 0,4 ml de GSH (0,1 mM).
 Ajouter 0,2 ml de la solution tampon TBS (Tris 50 mM, NaCl 150 mM pH 7.4).
 Incuber au bain marie 25°C, pendant 5 min.
 Ajouter 0,2ml de H2O2 (1,3 mM) pour initier la réaction, laisser agir 10 minutes.
 Ajouter 1 ml de TCA (1%) pour arrêter la réaction.
 Mettre le mélange dans la glace pendant 30 minutes.
 Centrifuger durant 10 minutes à 3000 tours /minutes.
 Prélever 0,48 ml du surnageant.
 Ajouter 2,2 ml de la solution tampon TBS.
 Ajouter 0,32 ml de DTNB (1,0 mM)
 Mélanger et après 5 minutes lire les densités optiques à 412 nm.

Variation du poids absolu de foie et des reins

La figure (23) montre les variations des poids absolu du foie et des reins, dont les résultats montrent une augmentation significative du poids de foie chez les rats des groupes Eth1 et Eth2 en comparant avec les autres groupes. Ainsi, les résultats montrent une diminution significative du poids des reins chez le groupe Eth2 par rapport aux autres groupes, tandis que les rats de groupe Eh1 ne montrent aucun changement des poids des reins par rapport aux autres groupes. Cependant, les résultats révèlent que le traitement des rats par l’infusion des graines de Silybum marianum chez les groupes combinés (Eth1+ISM and Eth2+ ISM) ne montre aucun changement significatif dans le poids absolu de foie et reins en comparant avec le groupe témoin.

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Table des matières

Introduction générale
Partie I : Synthèse bibliographique
I- L’éthanol
1- Identification de l’éthanol
2- La toxicocinétique de l’éthanol
2-1-L’absorption de l’éthanol
2-2- Distribution de l’éthanol
2-3-Métabolisme de l’éthanol
2-4-Excrétion de l’éthanol
3-Toxicité de l’éthanol
3-1-L’intoxication aiguë
3-2-Toxicité chronique
3-2-1-La maladie alcoolique du foie
3-2-2-Effet sur la fonction reproductrice
3-2-3-Effet cancérogène
3-2-4- L’éthanol et la santé cardiovasculaire
3-2-5-L’éthanol et le stress oxydatif
II- Silybum marianum
1-Présentation de Silybum marianum
2-Composition de Silybum marianum
3-Historique d’utilisation
4-Propriétés pharmacologiques de Silybum marianum
4-1-Activité antioxydantes
4-2-Effet contre les maladies du foie
4-3-Activité anti-cancéreuse
4-4-Activité anti-inflammatoire et immunomodulatrice
5-Toxicité de Silybum marianum
Partie II- Matériels et méthodes
I- Matériel utilisés
1-Matériel biologique
2-Produit chimique
2-1-L’éthanol
2-2- Silybum marianum
3-Protocole Expérimental
4-Prélèvement des échantillons
4-1-Prélèvement sanguin
4-1-Prélèvement du sperm épididymaire
4-3-Prélèvement des organes
II- Méthodes de dosage
1-Etude de la biologie des spermatozoïdes
1-1-La mobilité / concentration des spermatozoïdes
1-2-La vitalité des spermatozoïdes
2-Dosage de testostérone
3-Mesure des paramètres biochimiques
4-Mesure des paramètres hématologiques
5-Dosage des paramètres de stress oxydative
5-1-Dosage du malone-dialdehyde (MDA)
5-2-Dosage du Glutathion réduit (GSH)
5-3-Dosage de l’activité enzymatique du Glutathion Peroxydase (GPx)
5-4 Dosage des protéines
III-Étude statistique
Partie III- Résultats et Discussion
I- L’effet de l’éthanol sur la fonction reproductrice : l’effet protecteur de Silybum marianum
 Résultats
1-Influence du traitement sur la masse corporelle
2-Influence du traitement sur la fonction reproductrice
2-1-Variation du poids absolu des testicules et l’épididyme
2-2-Variations des paramètres biologiques des spermatozoïdes
2-2-1-Effet de traitement sur la concentration et la vitalité des spermatozoïdes
2-2-2-Effet de traitement sur les paramètres de la mobilité des spermatozoïdes
2-3-Variations de la concentration de testostérone
 Discussion
II- L’effet de l’éthanol sur la fonction hépatique et rénale : l’effet protecteur de Silybum marianum
 Résultats
1-Variation du poids absolu de foie et des reins
2-Variation des paramètres biochimiques
2-1-Effet sur l’activité des transaminases et phosphatase alkaline
2-2-Effet sur le bilan lipidique
3-Effet sur le bilan rénal
 Discussion
III- L’effet de l’éthanol sur les paramètres hématologiques : l’effet protecteur de Silybum marianum
 Résultats
 Discussion
IV- L’effet de l’éthanol sur les paramètres du stress oxydatif : l’effet protecteur de Silybum marianum
 Résultats
 Discussion
Conclusion et perspective
Références
Annexe