Soutenance mémoire
Introduction
Chapitre I: Rappel bibliographique
I.1. Description de la plante étudiée
I.1.1.La famille des Fabaceae
Caractères botaniques de la famille
Appareil végétatif
Appareil reproducteur
Phylogénie
I.1.2. La sous-famille des Papilionoideae
Caractères botaniques
I.1. 3 Le genre Calycotom
Origine du nom
Utilisation
Classification scientifiquede C. spinosa
I.1.4 Etudes chimiques sur la famille des Fabaceae
I.I.5 Les travaux antérieurs sur la phytochimie du genre calycotome
Chapitre II: Les composés flavonoidique
II.1 Les Flavonoides
II.2. Classes des Flavonoides
-Flavones, Flavonols
-Flavanones
-Isoflavones
-Chalcones, aurones
-Biflavonoïdes
-Les anthocyanidines
-Hétérosides flavonoïdiques
II.3. Biosynthèse des Flavonoides
II.4. Le Rôle Bioactif des Flavonoides
II.5. Etude Chimique des Flavonoïdes
II.5.1. Chromatographie
II. 5.2. Spectroscopie UV
II. 5.3. Spectrométrie de Masse
Chapitre III: Résultats et discussion
III.1 Introduction
III.2 Extraction
III.2.1 Macération
Protocole
III.2.2 Séparation
A-Extrait chloroformique
B- Extrait butanolique
III.2.3 Purification
A- Extrait chloroformique
B- Extrait butanolique
III.3 Détermination de structure des composés isolés
III.3.1 Identification du produit M1
III.3.2 Identification du produit M2
III.3.2 Identification du produit M3
III.3.2 Identification du produit M4
Conclusion
Chapitre IV : Partie expérimentale
IV.1 Introduction
IV.2 Matériel Végétal
IV.3 Méthodes Physico-chimiques
IV.3.1 Spectres de Masse (MS)
IV.3.2 Spectres de Résonance Magnétique Nucléaire (RMN)
IV.3.3 Spectroscopie Infrarouge (IR)
IVI.3.4Chromatographies
IV.3.4.1 CHROMATOGRAPHIE SUR COUCHE MINCE (CCM)
IV.3.4.2 CHROMATOGRAPHIE SUR COLONNE (CC)
IV.4 Méthodes de fractionnement et de Purification
IV.4.1 Extrait chloroformique
VI.4.1.1. Purification
Etude de (A-3+A-4)
VI.4.2 Extrait méthanolique
VI.2.1. Purification
Etude de C-12
VI.4.3. Composés isolés de l’espèce Calycotome spinosa
VI.4.3.1. Composé M1
VI.4.3.2. Composé M2
VI.4.3.3. Composé M3
VI.4.3.4. Composé M4
Références bibliographiques
Résumé
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Introduction
Les méthodes spectroscopiques sont utilisées pour la caractérisation des produits chimiques. Parmi les techniques utilisées pour les composés organiques, la spectrométrie de masse (MS) et la résonance magnétique nucléaire (RMN) sont les plus fréquentes ainsi que la spectroscopie Infrarouge (IR).
Dans ce chapitre, nous présentons les protocoles expérimentaux et détermines les structures des composés isolés.
Les composés et les protocoles expérimentaux sont classés par ordre croissant par rapport au numéro que nous leur attribuons dans le chapitre suivant.
Extraction
La plante Calycotome spinosaa été récoltée entre les mois de mai et de juin, la plante a été séchée à l’abri du soleil.
Macération
Un poids de 1 Kg de la plante sèche a subi durant 24h. Une macération et lixiviation dans un système de solvant (MeOH/ H2O, 80/20: v/v) à température ambiante. La solution obtenue après filtration et concentration en ajoutant de l’eau distillée (300ml) a subi une extraction liquide- liquide avec des solvants organiques suivants:
* L’éther de pétrole (3×500 ml), après concentration à sec, l’extrait brut obtenu a eu une masse de 3g.
* Le chloroforme (3×500 ml), après concentration à sec, l’extrait brut obtenu est d’une masse de17g.
* Le n-butanol (3×500 ml), après concentration à sec, l’extrait brut obtenu est de 30g.
Les différentes étapes de cette extraction sont récapitulées dans la figure III.20.
CHROMATOGRAPHIE SUR COUCHE MINCE (CCM)
Les CCM sont effectuées au moyen de couches minces (0.2 mm d’épaisseur) avec gel de silice 60 F254 indicateur de fluorescence sur aluminium (Merck) ou sur verre.
Après élution dans le solvant donné, et selon les cas, les plaques sont révélées par une lampe UV (254 nm et/ou 366 nm) puis par révélation à l’aide de la vanilline sulfurique. Les plaques sont ensuite chauffées jusqu’à apparition de tâches de diverses couleurs sur la plaque CCM.
CHROMATOGRAPHIE SUR COLONNE (CC)
Des colonnes ouvertes sur gel de silice (60-230mesh) ont été utilisées dans la première ou seconde étape de fractionnement de l’extrait chloroformique et nbutanolique. La taille des colonnes, la granulométrie de la phase solide, le débit de la phase mobile et la taille des fractions ont été adaptés à la quantité et à la nature des échantillons à séparer. Le choix des conditions d’élution, le suivi de la séparation et le rassemblement final des fractions ont été effectués sur la base d’analyses par CCM.
Méthodes de fractionnement et de Purification
Après avoir séché la plante à l’air libre, la partie aérienne est extraite pour leur faire subir initialement la phase de macération et lixiviation dans laquelle nous procédons à la préparation des extraits bruts de plante. Ensuite, dans un deuxième temps, les extraits bruts sont fractionnés par des méthodes chromatographiques puis éventuellement purifiés.
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