Soutenance mémoire
Animaux d’expérience
Pour les trachées utilisées pour les tests in vitro, elles ont été isolées chez des cochons d’Inde mâle ou femelle, âgés de 4 à 5 mois et pesant entre 250 et 350 g. Les animaux ont été achetés auprès des éleveurs. Puis, ils ont été élevés, acclimatés pendant 2 semaines dans l’animalerie de l’IMRA et nourris avec de l’herbe fraîche avant leur utilisation. Des souris de race SWISS, pesant entre 25 à 30 g et âgées de 12 à 15 semaines ont été utilisées pour évaluer l’innocuité du L-MTK. Elles ont été élevées dans l’animalerie de l’IMRA avec un rythme lumière/obscurité naturelle et nourries avec de la provende LFL 14/20 et ont eu accès à l’eau at libidium.
Préparation de la trachée isolée
Le cochon d’Inde a été tué par dislocation cervicale suivie d’exsanguination au niveau des veines jugulaires. Après l’ouverture de la peau et de la couche musculaire à partir de sa mâchoire inférieure jusqu’à la partie supérieure du thorax, la trachée a été dégagée. Puis, un morceau de la trachée de 1,5 à 2 cm de long a été prélevé rapidement et placé dans une boîte de pétri contenant de la solution physiologique de survie. La solution de survie est la solution de Krebs-Henseil légèrement modifiée dont la composition en mM dans l’eau distillée est de NaCl 118,1 ; KCl 4,7 ; CaCl2 2,5 ; MgSO4 1,2 ; NaHCO3 25 ; glucose 11,1 et KH2PO4 1,2. Le pH du milieu est de 7,4±0,1. L’organe y a été étalé pour le débarrasser des mésentères et des tissus adipeux. Ensuite, il a été découpé en spirale puis monté dans la cuve à organe à l’aide de deux fils mis sur ses deux bouts dont le premier le fixe au fond de la cuve et le second le relie au transducteur. La cuve à organe contenant la solution de survie est aérée en permanence au carbogène composé de 95% d’O2 et 5% de CO2. La solution physiologique a été maintenue à 37°C par un bain thermostaté. L’organe a été soumis à une tension de base de 2 g. Une fois monté, l’organe a été laissé s’adapter et s’équilibrer avec les conditions de l’expérimentation pendant 60 minutes. Ce temps d’équilibration a été entrecoupé par des renouvellements du milieu de survie dans la cuve à organe isolé toutes les 15 minutes. A la fin de l’équilibration, la viabilité et la sensibilité de l’organe ont été testées avec 10-5 M d’histamine. Puis l’organe a été rincé trois fois et laissé se relaxer jusqu’au retour à la tension initiale. Pendant ce temps de repos, le milieu de survie a été renouvelé toutes les 20 minutes (VAN ROSSUM J. M., 1963).
Etude de la toxicité aigüe
Cette étude a comme objectifs de déterminer des doses létales provoquées par une administration unique des différentes doses de L-MTK chez la souris et de détecter des signes d’intoxication liée à cette administration durant les 3 jours d’observation. L-MTK solubilisé dans l’eau distillée a été administré par voie orale par gavage à raison de 10 ml/kg du poids corporel. Les souris ont été mises à jeûne 12 h avant le début de l’expérience. Les animaux ont été répartis en 6 lots de 5 souris. Le premier lot n’a reçu que 0,25 ml du véhicule qui est l’eau distillée tandis que les autres lots ont reçu respectivement 0,5 ; 1 ; 2 ; 3 et 4g/kg de L-MTK (VAGHASIYA Y. K. et coll., 2011). Apres le traitement, les animaux ont eu accès libre à l’eau et à la nourriture. L’observation a duré 3 jours. Elle a été faite de façon permanente pendant les 8 premières heures qui ont suivi l’administration et puis toutes les 24 h pendant 3 jours. Au cours de l’observation, tous les comportements anormaux des animaux par rapport aux témoins ainsi que les mortalités ont été notés (ONIFADE A. O. et coll., 2011).
EXPRESSION DES RESULTATS ET ANALYSE STATISTIQUE
Les paramètres pharmacologiques (CE50, % I°) ont été exprimés sous forme de moyenne des n valeurs plus ou moins e.s.m où n indique le nombre d’expériences réalisées séparément ou le nombre d’animaux utilisés pour chaque test. La signification des différences observées entre les moyennes a été évaluée au moyen du test « t » de Student en utilisant le logiciel « Excel 2010 ». Pour une valeur de p inférieure à 0,05, la différence est considérée comme statistiquement significative.
Conclusion
Pour conclure, le jus lyophilisé des fruits de la plante MTK possède une activité broncho-relaxante de la trachée isolée pré-contractée avec l’histamine ou l’acétylcholine qui est à l’origine de sa vertu spasmolytique en cas de crise d’asthme. Cet effet pourrait être secondaire à l’inhibition de l’influx calcique nécessaire à la contraction des cellules musculaires lisses bronchiales. A 4 g/Kg par voie orale, L-MTK induit une somnolence mais ne provoque aucune mortalité chez la souris.
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Table des matières
I. Liste des tableaux
II. Listes des figures
III. Liste des abréviations
I. MATERIEL VEGETAL
II. ETUDES PHYTOCHIMIQUES
a. Préparation de l’extrait
b. Criblage phytochimique
III. TESTS PHARMACOLOGIQUES
1. Animaux d’expérience
2. Les produits utilisés
3. Etude, in vitro, sur trachée isolée de cochon d’Inde de l’effet de L-MTK
4. Etude de la toxicité aigüe
IV. EXPRESSION DES RESULTATS ET ANALYSE STATISTIQUE
I. RESULTATS DES TESTS PHYTOCHIMIQUES
a. Rendements de la lyophilisation
b. Résultats du criblage phytochimique
II. RESULTATS DES TESTS PHARMACOLOGIQUES
1. Résultats des tests, in vitro, sur trachée isolée de cochon d’Inde
2. Résultats de l’étude de toxicité aigüe de L-MTK par voie orale
REFERENCES BIBLIOGRAPHIQUES
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