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PARTIE PHARMACOLOGIQUE
L`activité de l`extrait HWF 92 a été étudiée chez le cochon d`Inde. Son effet sur la sécrétion intestinale a été étudié in vivo en utilisant la méthode d`enteropooling provoquée par l’huile de ricin pure administrée par voie orale, et son effet sur le péristaltisme intestinal a été étudié in vitro en utilisant l’iléon isolé de cochon d’Inde contracté avec l’acétylcholine.
Animaux d’expérimentation
Des cochon d`Inde mâles et femelles, pesant entre 200 et 300 grammes ont été utilisés pour cette étude. Ils ont été élevés à l’animalerie du Laboratoire de Pharmacologie Générale, Pharmacocinétique et de Cosmétologie (LPGPC) de la Faculté des Sciences, de l’Université d’Antananarivo, avec un cycle de lumière et d’obscurité de 12/12 heures et nourris avec des feuilles fraiches de graminées. Les animaux ont été mis à jeun pendant 18 heures avant les tests.
Étude de l’effet de l’extrait sur la diarrhée provoquée par l’huile de ricin
L’effet de l’extrait contre la diarrhée provoquée par l’huile de ricin a été étudié in vivo en étudiant le volume du fluide intestinal ou « enteropooling » (DOHERTY, 1981).
Des animaux mis à jeun pendant 18 heures ont été utilisés. Ils ont été répartis en 4 lots : 1 lot témoin, et 3 lots traités avec l`extrait.
Les animaux du lot témoin ont reçu 10 ml/kg d’eau distillée, par voie orale, et les animaux des trois autres lots ont respectivement reçu 100, 200 et 400 mg/kg d’extrait dans 10 ml/kg d’eau distillée par voie orale (EZEKWESIL et al., 2004).
Après 45 minutes, 1 ml d’huile de ricin pure a été administré par voie orale chez tous les animaux (AKUODOR et al, 2011). Trente minutes après l’administration de l’huile de ricin, les cochons d`Inde ont été anesthésiées par inhalation d’éther éthylique et exsanguinés en coupant les deux carotides. Ensuite, une laparotomie a été effectuée. L’intestin grêle a été repéré, puis un noeud a été fixé au niveau du pylore et un deuxième au niveau de la jonction iléocoecale. Il a ensuite été prélevé dans sa totalité, puis son contenu a ensuite été versé dans un tube et centrifugé à la vitesse de 3000 tours par minute, pendant 10 minutes. Le surnageant a été récupéré puis versé dans une éprouvette graduée et son volume a été mesuré (MAMINILAINORO, 1996).
Étude de l’effet de l’extrait HWF92 sur le péristaltisme intestinal
Pour étudier l’effet de l’extrait HWF92 sur le péristaltisme intestinal, son effet a été étudié in vitro sur la contraction provoquée par l’acétylcholine sur l’iléon isolé de cochon d’Inde (HAMMAD et al. 1997).
Préparation et montage de l’organe
L’animal a été mis à jeun pendant 18 heures avant la manipulation, puis anesthésié par inhalation d’éther éthylique et exsanguinés en coupant les deux carotides. Une laparotomie a ensuite été pratiquée et l’iléon a été prélevé, puis placé dans une boîte de pétri contenant une solution de Tyrode (Tableau II) à la température ambiante et aéré avec de l’air, à l’aide d’un aérateur électrique (KOKO-108©). Il a ensuite été coupé en segments de 2 cm (PRASHANT et al., 2013)
Etude de l’effet de l’extrait sur la contraction provoquée par l’acétylcholine
L`acétylcholine a été injectée dans le bain de façon cumulative afin de réaliser des concentrations croissantes à partir de 10-9 M jusqu`à l`obtention de la contraction maximale de l`organe. Au plateau de contraction, l’extrait a été injecté dans le bain d`une manière cumulative.
Etude de l’effet de HWF92 sur la contraction provoquée par l’acétylcholine
Pour étudier le mécanisme d’action de l`extrait, son effet vis-à-vis de l’acétylcholine a été étudié. Après la période de stabilisation et de sensibilisation, l’organe a été incubé dans le bain contenant l’extrait aux concentrations respectives de 0,125, 0,25 et 0,5mg/ml pendant 15 minutes.
Dans un premier temps, l’acétylcholine a été injectée dans le bain de façon cumulative afin d’obtenir des concentrations croissantes à partir de 10-9 M jusqu’à l’obtention de la contraction maximale de l’organe. Au plateau de la contraction, l’organe a été rincé, puis laissé se stabiliser de nouveau pendant 45 minutes en rinçant toutes les 15 minutes. Puis dans un second temps, l’extrait a été injecté dans le bain afin de réaliser la concentration de 0,125 mg/ml, et l’organe a été incubé dans ce bain pendant 15 minutes avant d’injecter l’acétylcholine dans le bain jusqu’à l’obtention de la contraction maximale. Ensuite l’organe a été rincé puis laissé se stabiliser, et la même manipulation a été réalisée en présence de l’extrait HWF92 à la concentration de 0,25 et 0,5 mg/ml
PARTIE PHARMACOLOGIQUE
Effet de l’extrait HWF92 sur la diarrhée provoquée par l’huile de ricin
L’administration de l’huile de ricin par voie orale chez les cochons d’Inde provoque une accumulation de fluide dans la lumière intestinale. Le volume de fluide dans la lumière intestinale des animaux traités avec l’extrait est inférieur à celui des animaux du lot témoin. Ce volume diminue en augmentant la dose de l’extrait administrée. Le volume du fluide intestinal chez les animaux du lot témoin est égal à 3 ml contre 2,36 ± 0,051, 1,96 ± ,064 et 1,13 ± 0,10 ml chez les animaux des traités avec l’extrait HWF92 aux doses de 100, 200 et 400 mg/kg (P < 0,05) (Figure 1). Ces résultats montrent que l’extrait HWF92 inhibe la diarrhée sécrétoire provoquée par l’huile de ricin administrée par voie orale.
Effet de l’extrait HWF92 sur le péristaltisme intestinal
L’acétylcholine injectée dans le bain contracte l’iléon isolé du cochon d’Inde. En augmentant sa concentration dans le bain, l’amplitude de la contraction augmente. La contraction maximale est obtenue à la concentration de 10 -3 M d’acétylcholine. L’injection de l’extrait HWF92 dans le bain relâche l’iléon du cochon d’Inde contracté avec l’acétylcholine, et ce relâchement augmente avec la concentration de l’extrait dans le bain. A la concentration de 0,25 mg/ml, l’extrait provoque un relâchement de 41,66 ± 1,51% et 100 % à la concentration de 0,75 mg/ml (P < 0,05), les valeurs de la CE50 de l’extrait est égale à 0,37 mg/ml (Figure 2). D’après ces résultats, il apparait que l’extrait HWF92 inhibe le péristaltisme intestinal.
Mécanisme d’action de l’extrait HWF92
En absence de l’extrait, l’amplitude de la contraction maximale de l’iléon de cochon d’Inde provoquée par l’acétylcholine est égale à 100 % et la CE50 de l’acétylcholine est égale à 5,45.10-6 M. En incubant l’iléon dans le bain avec de l’extrait avant d’injecter l’acétylcholine, l’amplitude maximale de la contraction de l’iléon provoquée par l’acétylcholine diminue et la valeur de CE50 de l’acétylcholine augmente. En présence de l’extrait aux concentrations respectives de 0,25, 0,50 et 0,75mg/ml dans le bain, l’effet maximal diminue à 69,73 ± 1,05, 44,73 ± 1,14 et 26,31 ± 0,30 % (P < 0,05) et la CE50 augmente respectivement de 5,45.10-6 M à 7.10-6, 1,52.10-5 et 4,83.10-5 M (P < 0,05) (Figure 3). Ces résultats montrent que l’extrait HWF92 inhibe l’effet de l’acétylcholine d’une manière non compétitive.
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Table des matières
LISTE DES SIGLES ET DES ABRÉVIATIONS
I. INTRODUCTION
II. MATERIÉLS ET MÉTHODES
A. Partie chimique
1. Préparation de l’extrait
2. Criblage phytochimique
B. Partie pharmacologique
1. Animaux d’expérimentation
2. Étude de l’effet de l’extrait HWF92 sur la diarrhée provoquée par l’huile de ricin
3. Étude de l’effet de l’extrait HWF92 sur le péristaltisme intestinal
4. Étude de l’effet de l’extrait HWF92 sur la contraction provoquée par l’acétylcholine
C. Expression et analyse des résultats
III. RÉSULTATS
A. Partie chimique
1. Rendement de l’extraction
2. Résultats du criblage phytochimique
B. Partie pharmacologique
1. Effet de l’extrait HWF92 sur la diarrhée provoquée par l’huile de ricin
2. Effet de l’extrait HWF92 sur le péristaltisme intestinal
3. Effet de l’extrait HWF92sur la contraction provoquée par l’acétylcholine
IV. DISCUSSION
CONCLUSION
BIBLIOGRAPHIE
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