Soutenance mémoire
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Préparation de l’extrait
La plante utilisée dans cette étude a été récoltée au mois de décembre 2014 près des rizières d’Ambolikandrina (Antananarivo). La plante entière été séchée à l’ombre à la température ambiante pendant sept semaines. Les plantes sèches ont été broyées à l’aide d’un broyeur à marteau (BROOK CROMPTON, Séries 2000). Trois cent grammes de la poudre obtenue ont été macérés dans un mélange d’éthanol-eau (60 : 40 ), pendant 72h à la température ambiante. Le mélange a été agité de temps en temps. Le macérât obtenu a été filtré sur papier filtre Whatman, et le filtrat a été évaporé à sec sous vide à la température de 80°C à l’aide d’un rotavapor EVAPOTECTM jusqu’à l’épuisement total du solvant afin d’obtenir l’extrait RA001 (figure 3). L’extrait ainsi obtenu a été pesé et le rendement de l’extraction a été calculé par la formule suivante.
Criblage phytochimique
Pour déterminer les différentes familles chimiques présentes dans l’extrait RA001 et d’estimer leur abondance relative, des réactifs spécifiques pour chaque famille chimique ont été utilisés. Ces réactifs réagissent avec la famille correspondante en formant un complexe soluble coloré (réaction de coloration) ou un complexe insoluble (précipité) (IGAN C., 1982) (tableau I). Pour indiquer la présence des familles chimiques présentes dans l’extrait ainsi que leur abondance relative, les signes suivants ont été utilisés:
(-) : absence de la famille chimique recherchée.
(+) : présence à très faible concentration de la famille chimique recherchée.
(++) : présence de la famille chimique à moyenne concentration.
(+++) : présence de la famille recherchée à forte concentration.
Etude de l’effet antisécrétoire de l’extrait RA001
Pour étudier l’effet de l’extrait RA001 sur l’hyperacidité du suc gastrique, sa capacité d’inhiber la sécrétion de l’ion H+ a été étudiée chez le rat selon la méthode de SHAY, (SHAY H. et coll., 1945). Des rats de race Wistar âgés de 7 semaines, ayant un poids moyen compris entre 200 et 250g ont été utilisés. Ils ont été mis à jeun 24 heures avant la manipulation et ont eu de l’eau à volonté. Les animaux ont été ensuite divisés en 3 lots de trois rats : un lot témoin, et 2 traités avec l’extrait RA001. Les animaux du lot témoin ont reçu de l’eau distillée (10 ml / kg) et les animaux des deux autres lots ont reçu l’extrait RA001 à la dose de150 et 300 mg / kg respectivement dans un volume de10 ml/kg (DE-FARIA F.M. et coll., 2012). Une heure après l’administration de ces produits, les animaux ont été anesthésiés avec de l’éther diéthylique. Leur abdomen a été incisé en dessous de la pointe du sternum puis le pylore a été repéré et ligaturé. Ensuite, l’abdomen a été refermé et suturé; et les animaux ont été laissés se rétablir dans des cages individuelles. Quatre heures plus tard, les animaux ont été euthanasiés, leur estomac a été prélevé et le contenu gastrique a été recueilli dans un tube gradué, puis centrifugé à 3000trs/min pendant 7 min. Le pH a été mesuré à l’aide un pH-mètre numérique PIERRON® (figure 4).
Etude de l’activité mucoprotectrice de l’extrait RA001
Pour étudier l’effet mucoprotecteur de l’extrait RA001, des lésions au niveau de la paroi gastrique ont été provoquées chez les rats, en administrant par voie orale de l’indométacine à la dose de 30 mg/kg pendant cinq jours successifs (ODE O.J.et coll., 2011). Des rats âgés de 6 semaines pesant entre 160 et 190 g, ont été utilisés. Ils ont été répartis en trois lots de trois rats, puis mis à jeun vingt-quatre heures avant l’expérience avec un accès libre à l’eau. L’indométacine a été administrée par voie orale à la dose de 30mg/kg dans un volume de 10ml/kg. Quatre heures après son administration, le lot témoin a reçu de l’eau distillée, les deux autres lots ont reçu par voie orale l’extrait RA001 à 150 et 300 mg/kg dans un volume10 ml/kg pendant cinq jours (DIELH-HEINZ K., 2010). Au sixième jour, les animaux ont été euthanasiés et leur estomac a été prélevé, rincé et étalé sur une surface plane afin de mesurer la surface de la lésion par la méthode planimétrie directe. Un papier millimétré transparent a été placé sur la surface de l’estomac et le contour des lésions a été tracé sur le papier millimétré à l’aide d’un crayon à pointe fine pour déterminer leur surface.
Expression et analyses des résultats
Les résultats obtenus ont été exprimés sous forme de moyenne avec écart-type réduit ( ± e.s.m.). Les moyennes ont été comparées entre elles en utilisant le test paramétrique « t » de Student avec un degré de signification de p <0,05.
Effet antisécrétoire de l’extrait RA001
L’effet antisecrétoire de l’extrait RA001 a été étudié en ligaturant le pylore des animaux. D’après les résultats obtenus, le pH du suc gastrique des animaux traités avec l’extrait RA001 est supérieur à celui des animaux témoins, et cette valeur augmente en fonction de la dose administrée. Pour le lot témoin, le pH du suc gastrique est égal à 2,33± 0,24. Chez les animaux traités avec l’extrait RA001 à la dose de 150 mg/kg de l’extrait, le pH est égal à 3,96 ± 0,57 et 4,05± 0,21 avec la dose de 300mg/kg (p<0,05) (figure 5). Cette augmentation du pH traduit une diminution de l’acidité du contenu gastrique ce qui indique une activité antisécrétoire de l’extrait RA001.
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Table des matières
MATERIELS ET METHODES
I.1. Préparation de l’extrait
I.2. Criblage phytochimique
II.TESTS BIOLOGIQUES
1. Etude de l’effet antisécrétoire de l’extrait RA001
2. Etude de l’activité mucoprotectrice de l’extrait RA001
3. Expression des résultats et analyses statistiques des données
RESULTATS
I .PARTIE CHIMIQUE
II .PARTIE BIOLOGIQUE
1. Effet antisécrétoire de l’extrait RA001
2. Effet mucoprotecteur de l’extrait RA001
DISCUSSION
CONCLUSION
BIBLIOGRAPHIE
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