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Le diabète est un trouble métabolique chronique qui affecte de plus en plus de gens dans le monde. Il devient un véritable problème de santé publique (ZHOU et coll., 2009). Selon l’Organisation Mondiale de la Santé (OMS), environ 108 millions de personnes sont atteintes de diabète dans le monde en 1980 contre 422 millions en 2014 (OMS, 2017). D’ici 2030, ces valeurs pourraient augmenter à environ 439 millions (SHAW J. E. et coll., 2010). En Afrique, il y aura une augmentation de 180%, soit une hausse de 3 à 8 millions de personnes atteintes de diabète (CRUICKSHANK J. K., 2001). Selon la Fédération Internationale de Diabète (FID), 352000 personnes sont atteintes de diabète à Madagascar en 2013, et les adultes en sont les plus touchés (FID, 2013).
Le diabète est caractérisé par un état hyperglycémique chronique qui peut aller jusqu’ à 1.26 g/l (7 mmol/l) d’une manière permanente, or la valeur normale de la glycémie est de 4 à 6 mmol/l (BUYSSCHAERT M. et coll., 1999 ; RACCAH D., 2004). Cette glycémie est régulée par deux hormones: l’insuline et le glucagon. L’insuline est une hormone hypoglycémiante sécrétée par les cellules β des ilots de Langerhans (ANDREELLI F., 2003). Tandis que le glucagon est une hormone hyperglycémiante libérée par les cellules α des ilots de Langerhans (ANDREELLI F., 2003). L’élévation de la glycémie provoque la sécrétion de l’insuline (DOLZ M., 2008). Cette hormone favorise le stockage du glucose sous forme de glycogène au niveau du foie et du muscle par glycogénogenèse, ou sous forme de triglycéride dans les tissus adipeux par lipogenèse (GERALD J. et TABORSKY J. R., 2010), en favorisant la pénétration du glucose dans les myocytes et les adipocytes par l’intermédiaire des transporteurs du glucose « GLUT-4 » (MALAISSE W. J. et coll., 1982).
MATÉRIELS ET MÉTHODES
PARTIE CHIMIQUE
Préparation de l’extrait
Les feuilles de la plante ont été récoltées à Andapa dans la région de SAVA au mois d’octobre 2016. Elles ont été séchées à l’ombre dans une salle aérée, à la température ambiante, pendant 3 mois. Une fois séchées, elles ont été broyées à l’aide d’un broyeur à marteau (BROOK CROMPTON, séries 2000). Deux cent grammes de la poudre obtenue ont été macérés dans un mélange éthanol – eau (60 : 40), à la température ambiante pendant 3 jours, en agitant une fois par jour. Ensuite, le macérât a été filtré sur du coton hydrophile et le filtrat a été évaporé à l’aide d’un distillateur à la température de 80 °C, puis au bain marie à la température de 100 °C .
Criblage phytochimique
Un criblage phytochimique a été effectué sur l’extrait AM03 dans le but de déterminer les familles chimiques présentes dans cet extrait. Les tests utilisés lors du criblage phytochimique sont basés sur des réactions de coloration et de précipitation entre des réactifs spécifiques et les familles chimiques correspondantes présentes dans l’extrait (FONG H. H. S. et coll., 1997) .
Les signes suivants ont été utilisés afin de quantifier la proportion de ces différentes familles :
+++ : Présence en forte teneur
++ : Présence en teneur moyenne
+ : Présence en faible teneur
± : Présence en très faible teneur .
PARTIE PHARMACOLOGIQUE
L’activité de l’extrait AM03 a été étudiée chez la souris de race Swiss rendue hyperglycémique. L’hyperglycémie transitoire a été provoquée par l’administration d’une solution glucosée, tandis que l’hyperglycémie chronique a été provoquée par injection d’alloxane.
Animaux d’expérimentation
Des souris de race Swiss mâles, âgés de 3 mois pesant entre 22 et 26 g ont été utilisées. Elles ont été élevées à l’animalerie du Laboratoire de Pharmacologie Générale, de Pharmacocinétique et de Cosmétologie (LPGPC), de la Faculté des Sciences de l’Université d’Antananarivo. Ils ont été soumis à un cycle de lumière et d’obscurité 12 h/12 h à la température ambiante, nourris avec de la provende LFL 1420 et ont eu accès libre à de l’eau. Ces animaux ont été mis à jeun pendant 16 h avant toutes les manipulations, puis répartis en 4 lots: un lot témoin et 3 lots traités avec l’extrait à différentes doses.
Mesure de la glycémie
Pour mesurer la glycémie des souris, une goutte de sang a été prélevée au niveau de leur veine mandibulaire en piquant à l’aide d’une lancette stérilisée, puis la goutte de sang qui en coulait a été recueillie sur une bandelette réactive d’un glucomètre One Call Plus ©. Cette bandelette a ensuite été insérée dans le glucomètre et la glycémie s’affiche sur l’écran de l’appareil.
Étude de l’effet de l’extrait AM03 sur la glycémie de base
Pour étudier l’effet de l’extrait AM03 sur la glycémie de base, des souris normo glycémiques ont reçu l’extrait AM03 par voie orale, et la variation de leur glycémie a été suivie. Les souris ont été mises à jeun pendant 16 heures avant le test, puis réparties en quatre lots de trois souris. L’extrait a été dissout dans de l’eau distillée, et administré par voie orale. Au temps T0, leur glycémie de base a été mesurée et immédiatement après, les souris du lot témoins ont reçu 10 ml/kg d’eau distillée, tandis que celles du lot traité ont reçu de l’extrait aux doses respectives de 50, 100 et 200 mg/kg dans 10 ml/kg d’eau distillée (DIELH K. H. et HEINZ K., 2010). Un prélèvement sanguin a été effectué toute les 30 min pendant 90 min après l’administration de l’extrait, pour suivre la variation de la glycémie de ces animaux (SY G. Y. et coll., 2008).
Étude de l’effet de l’extrait AM03 sur l’hyperglycémie transitoire
L’activité de l’extrait AM03 a été étudiée sur l’hyperglycémie transitoire provoquée chez les souris en leur administrant une solution glucosée par voie orale (KERNAN W. N. et coll., 2005). Elles ont été mises à jeun pendant 16 h avant l’expérience mais ont eu accès libre à de l’eau, puis ont été réparties en 4 lots de 3 souris: 1 lot témoin et 3 lots traités avec l’extrait aux différentes doses. Le lot témoin a reçu 10 ml/kg d’eau distillée, tandis que les 3 autres lots ont reçu l’extrait aux doses respectives de 50, 100 et 200 mg/kg par voie orale dans 10 ml/kg d’eau distillée (DIELH K. H. et HEINZ K., 2010). Au temps To, la glycémie de base de tous les animaux a été déterminée. Ensuite, les souris du lot témoin ont reçu 10 ml/kg d’eau distillée, tandis que les souris des lots traités ont reçu respectivement de l’extrait AM03 aux doses de 50, 100 et 200 mg/kg dans 10 ml/kg d’eau distillée (DIELH K. H. et HEINZ K., 2010). Au temps T1, c’est à dire 30 min après l’administration de l’eau distillée et de l’extrait AM03, toutes les souris ont reçu 4 g/kg d’une solution de glucose par voie orale dans un volume de 10 ml/kg. Ensuite, toutes les 30 min et ceci pendant 90 min après l’administration de la solution de glucose, une saignée a été effectuée au niveau de la veine mandibulaire de la souris et une goutte de sang a été recueillie sur une bandelette du glucomètre One Cal Plus© pour mesurer la glycémie (SY G. Y. et coll., 2008).
Étude de l’effet de l’extrait AM03 sur la glycémie chronique
Pour étudier l’activité de l’extrait sur une hyperglycémie chronique, l’alloxane a été injectée par voie intra péritonéale chez la souris (DOUPA D. et coll., 2014). Des souris de sexe mâle pesant en moyenne 22 à 26 g ont été utilisées. Elles ont été mises à jeun pendant 16 h avant l’expérience mais ont eu accès à de l’eau. Puis 150 mg/kg d’alloxane dissout dans de l’eau distillée a été injecté par voie intra péritonéale dans un volume de 10 ml/kg (AHMED M. S. et coll., 2005). Trois jours après l’injection d’alloxane, leur glycémie a été mesurée à jeun (DOUPA D. et coll., 2014), les souris qui ont présenté une glycémie supérieure ou égale 6,66 mmol/l ont été retenues pour l’expérimentation (STANELY M. P. P. et coll., 1998). Ces souris ont ensuite été réparties en 2 lots de 3 souris: 1 lot témoin et 1 lot traité avec l’extrait AM03. Le premier lot a reçu 10 ml/kg d’eau distillée, tandis que le deuxième lot a reçu l’extrait à la dose de 200 mg/kg dans 10 ml/kg d’eau distillée, par voie orale, 1 fois par jour, à la même heure, pendant 7 jours. La glycémie de ces souris a été mesurée au premier jour (J1) ; puis au troisième (J3) ; au cinquième (J5) et au septième (J7) jour du traitement, à la même heure avant l’administration de l’eau et de l’extrait (DOUPA D. et coll., 2014).
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Table des matières
I. INTRODUCTION
II. MATÉRIELS ET MÉTHODES
A. PARTIE CHIMIQUE
1. Préparation de l’extrait
2. Criblage phytochimique
B. PARTIE PHARMACOLOGIQUE
1. Animaux d’Expérimentation
2. Mesure de la glycémie
3. Étude de l’effet de l’extrait AM03 sur la glycémie de base
4. Étude de l’effet de l’extrait AM03 sur l’hyperglycémie transitoire
5. Étude de l’effet de l’extrait AM03 sur l’hyperglycémie chronique
C. EXPRESSION ET ANALYSE DES RÉSULTATS
III. RÉSULTATS
A. PARTIE CHIMIQUE
1. Rendement de l’extraction
2. Résultats du criblage phytochimique
B. PARTIE PHARMACOLOGIQUE
1. Effet de l’extrait AM03 sur la glycémie de base
2. Effet de l’extrait AM03 sur l’hyperglycémie transitoire
3. Effet de l’extrait AM03 sur l’hyperglycémie chronique
IV. DISCUSSION
V. CONCLUSION
BIBLIOGRAPHIE
