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PARTIE PHARMACOLOGIQUE
L’activité anti diarrhéique de l’extrait RTE 1609 a été étudiée chez le cobaye. Des tests in vivo ont été effectués pour étudier son activité anti sécrétoire et des tests in vitro pour étudier son effet spasmolytique.
Animaux d’expérimentation
Des cobayes mâles et femelles âgés de 3 à 4 mois et pesant entre 250 g et 300 g ont été utilisés. Ils ont été élevés à l’animalerie du Laboratoire de Pharmacologie Générale de Pharmacocinétique et de Cosmétologie, à la Faculté des Sciences, Université d’Antananarivo, à la température ambiante et à une alternance de lumière et d’obscurité de 12 h/12 h. Ils ont été nourris avec des feuilles fraîches de graminées puis mis à jeun 18 heures avant chaque test.
Etude de l’activité anti sécrétoire de l’extrait RTE 1609
L’activité anti sécrétoire de RTE 1609 a été étudiée in vivo sur la diarrhée osmotique provoquée par le MgSO4 administré par voie orale (LASKSHMINARAYANA M. et coll., 2011).
Des cobayes mis à jeun pendant 18h avant le test ont été utilisés. Ils ont été répartis en 3 lots : 1 lot témoin et 2 lots traités avec l’extrait. Les animaux du lot témoin ont reçu de l’eau distillée, tandis que les animaux des autres lots ont reçu l’extrait aux doses respectives 300 mg /kg et 600 mg/kg. L’eau distillée et l’extrait ont été administrés par voie orale dans un volume de 10 ml /kg (ZAVALA M. A. et coll., 1998).
Quarante-cinq minutes après administration des produits, 2 g/kg de sulfate de magnésium dissout dans de l’eau distillée ont été administrés par voie orale dans un volume de 50 ml/kg (LASKSHMINARAYANA M. et coll., 2011).
Après trente minutes, l’animal a été sacrifié puis exsanguiné en coupant la carotide. Une laparotomie a ensuite été pratiquée, puis l’intestin grêle a été ligaturé à deux endroits: l’un au niveau du pylore et l’autre au niveau de la jonction iléocoecale. La portion entre ces deux ligatures a été prélevée et le liquide intestinal dans cette portion a été recueilli dans des récipients gradués pour mesurer son volume (GALVEZ J., 1993).
Etude de l’effet de l’extrait RTE 1609 sur la motilité intestinale
L’effet de l’extrait RTE 1609 sur la motilité intestinale a été étudié in vitro en utilisant l’iléon isolé de cobaye contracté par l’acétylcholine (HAMMAD H .M. et ABDALLAH S. S., 1997).
Des cobayes mâles et femelles âgés de 3 à 4 mois et pesant entre 250 mg et 300 mg/kg ont été utilisés.
Ces animaux ont été mis à jeun pendant 18h avant la manipulation, puis ils ont été sacrifiés, et exsanguinés en coupant les deux carotides. Une laparotomie a été effectuée, et une portion d’iléon a été prélevée. Cet organe a été plongé dans une solution de Tyrode maintenue à la température de 37 °C, et aérée avec un aérateur, puis il a été nettoyé enlevant les mésentères. La solution de Tyrode utilisée est composée de (mM): NaCl: 136,9 ; NaCO3 :11,9; NaHPO4: 0,4; KCl : 2 ,7; CaCl2: 1,8; glucose: 5 ,6; eau distillée: 1litre (KAGBO H. D. et EYARU S. G., 2012; UKWUANI A. N. et coll., 2012; PRASHANT B. et coll., 2013).
Après le nettoyage, l’iléon a été coupé sur une longueur de 3 cm. L’organe ainsi préparé a ensuite été monté dans une cuve à organe isolé contenant 20ml de solution de Tyrode maintenue à la température de 37°C et aérée à l’aide d’un aérateur. Pour fixer l’iléon dans la cuve, une des extrémités a été fixée au fond de la cuve à l’aide d’un fil de coton inextensible, et l’autre extrémité a été reliée à un stylet enregistreur à l’aide d’un fil de coton avec un contrepoids de 1 g (MOHAMMED A. et coll., 2009).
L’organe a été laissé se stabiliser pendant 45 minutes. Pendant cette période de stabilisation, la préparation a été rincée toutes les 15 minutes. A la fin de cette période, l’iléon a été sensibilisé avec de l’acétylcholine à la concentration finale de 10-5 M dans le bain. Après la contraction, la préparation a été laissée de nouveau se stabiliser pendant 45 minutes durant laquelle, elle a été rincée toutes les 15 minutes. Après le dernier rinçage, l’acétylcholine a été injecté dans le bain d’une manière cumulative afin de réaliser des concentrations croissantes d’acétylcholine à partir de M dans le bain jusqu’à l’obtention de la contraction maximale.
Au plateau de la contraction, l’extrait RTE 1609 a été injecté dans le bain d’une manière cumulative jusqu’au relâchement total de l’organe contracté par l’acétylcholine (HAMMAD H. M. et ABDALLAH S. S., 1997).
L’amplitude des contractions provoquées par l’acétylcholine ainsi que le relâchement provoqué par l’extrait a été mesurée et reportée sur une échelle semi-logarithmique et la CE50 de l’extrait a été déterminée graphiquement.
Etude de l’activité spasmolytique de RTE 1609
L’activité spasmolytique de l’extrait RTE 1609 a été étudiée en incubant l’iléon dans un bain contenant l’extrait à différentes concentrations avant de le contracter avec de l’acétylcholine (HAMMAD H.M. et ABDALLAH S.S., 1997).
Après le montage, l’iléon isolé a été laissé se stabiliser pendant 45 minutes, durant lesquels, la préparation a été rincée toutes les 15 minutes. Après le dernier rinçage, l’iléon isolé a été contracté avec l’acétylcholine injectée dans le bain d’une manière cumulative à partir de la concentration de M dans le bain, jusqu’à l’obtention de la contraction maximale. Après l’obtention de la contraction maximale, la préparation a été laissée se stabiliser pendant 45 minutes. Pendant ce temps, elle a été rincée toutes le 15 minutes. Après cette période de stabilisation, l’extrait RTE 1609 a été injecté dans le bain afin d’obtenir la concentration finale de 0,125 mg/ml. Ensuite, l’organe a été incubé dans ce bain pendant 10 minutes avant de le contracter de nouveau avec de l’acétylcholine injectée dans le bain d’une manière cumulative jusqu’à l’obtention de la contraction maximale. Puis, la préparation a été laissée se stabiliser de nouveau pendant 45 minutes. Pendant cette période, elle a été rincée toutes les 15 minutes.
Après la période de stabilisation, la même manipulation a été effectuée en pré incubant l’organe dans le bain contenant de 0,25 mg /ml puis 0,50 mg /ml de l’extrait.
L’amplitude des contractions provoquées par l’acétylcholine en absence et en présence de l’extrait a été mesurée et reportée sur une échelle semi-logarithmique en fonction de la concentration de l’acétylcholine dans le bain et les CE50 ont été déterminées graphiquement.
Activité spasmolytique de l’extrait RTE 1609
En pré incubant l’iléon isolé dans le bain contenant de l’extrait RTE 1609 l’amplitude de la contraction maximale provoquée par l’acétylcholine diminue, et la CE50 de l’acétylcholine augmente. En absence de l’extrait, l’amplitude maximale est égale à 100% avec une CE50 égale à 3. M. En pré incubant l’organe dans un bain contenant l’extrait aux concentrations respectives de 0,125 mg/ ml, 0,25 mg/ ml et 0,50 mg/ ml, l’effet maximal diminue à 76, 59 ± 4,24%, 52,06 ± 3, 36% et 35,44±3, 36 %. Les CE50 sont respectivement égales à M, M et 5. M (p˂0 ,05) (Figure 3).
DISCUSSION
L’objectif du travail a été d’étudier l’activité de l’extrait RTE 1609 chez le cobaye. La plante à partir de laquelle RTE 1609 a été préparé est utilisée dans la médecine traditionnelle comme un anti diarrhéique.
Les résultats obtenus lors des tests in vivo montrent que l’extrait RTE 1609 diminue l’accumulation de fluide intestinal provoquée par le MgSO4. D’autre part, les résultats des tests in vitro sur la motilité intestinale montre que l’extrait relâche l’iléon isolé de cobaye contracté par l’acétylcholine. Nous avons choisi le MgSO4 pour évaluer l’activité anti-diarrhéique in vivo de l’extrait car il provoque une diarrhée osmotique (EWEK, 1988). C’est une substance osmotiquement active et peu absorbable au niveau de la lumière intestinale, et y retient l’eau par osmose
(AHMADU A. A. et coll., 2007). Les résultats de nos tests montrent que le volume du fluide intestinal chez les animaux traités avec l’extrait RTE 1609 est inférieur à celui des animaux témoins. Ce qui nous permet de dire que l’extrait a diminué l’accumulation de fluide intestinale provoqué par le MgSO4 chez les cobayes traités. Ceci pourrait être due à l’augmentation de la réabsorption d’eau ou à la diminution de la sécrétion d’eau dans la lumière intestinale en fermant les pores des couches externes de la muqueuse intestinale (AKROUM S., 2001 ; SANTA M. A., 2014).
Par ailleurs, les résultats des tests in vitro montrent que l’extrait relâche l’iléon contracté par l’acétylcholine. Cette diminution de la motilité intestinale prolonge la durée du transit intestinal. L’augmentation de la durée du transit intestinal laisserait à l’organisme le temps d’absorber l’eau contenue dans la lumière intestinale aboutissant à la réduction du volume d’eau dans les selles (CARRE D. et coll., 2001 ; CESARD J.P. et coll., 2002).
En analysant les résultats des tests effectués in vitro, en inhibant l’effet de l’acétylcholine d’une façon non compétitive, l’extrait RTE 1609 diminue l’effet maximal de l’acétylcholine et augmente la valeur de sa CE50. L’extrait pourrait alors agir par l’intermédiaire d’un autre type récepteur (RAJAMANICAM et coll., 2010).
Certaines familles chimiques présentes dans l’extrait RTE 1609 comme les tanins et les alcaloïdes pourraient être les responsables de cette activité. D’une part, les tanins sont des astringents, ils précipitent les protéines dans la muqueuse intestinale et ferment les pores, ce qui diminuerait la sécrétion intestinale (MAHA Y. A. et coll., 2013). Ils rendent également la muqueuse intestinale plus résistante et réduit le péristaltisme intestinal (MOHAMMED A., AHAMED et coll., 2009).
Par ailleurs, MAHA Y. A. et ses collaborateurs (2013) ont aussi rapporté que les tanins contenus dans l’extrait de Adansonia digitata, sont responsables de ces effets. D’autre part, des alcaloïdes peuvent aussi diminuer la contraction de muscle lisse intestinal (SHORDERET M. et coll., 1992). Comme c’est le cas des alcaloïdes dans l’extrait de Crataeva nurvala (INAYATULLA et coll.2010). Or nos résultats montrent que RTE 1609 inhibe la sécrétion intestinale et l’hyper motilité intestinale. En comparant ces résultats à ceux des autres chercheurs, nous pouvons dire que RTE 1609 possède une activité anti-diarrhéique. Cette activité est due soit aux tanins, ou aux alcaloïdes dans l’extrait. Des études approfondies sont nécessaires pour déterminer les molécules responsables de cette activité ainsi que leur mécanisme d’action.
CONCLUSION
Nos résultats montrent que l’extrait RTE 1609 possède une activité anti diarrhéique. Il diminue l’accumulation de fluide intestinale provoquée par le sulfate de magnésium et inhibe l’hypermotilité intestinale provoquée par l’acétylcholine. L’effet anti diarrhéique pourrait être dû à la présence des tanins et des alcaloïdes. Des études ultérieures porteront sur la purification de l’extrait et la détermination des principes actifs et leurs mécanismes d’action exacts.
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Table des matières
MATERIELS ET METHODES
I. PARTIE CHIMIQUE
1. Préparation de l’extrait RET 1609
2. Criblage phytochimique
II. PARTIE PHARMACOLOGIQUE
1. Animaux d’expérimentation
2. Etude de l’activité anti sécrétoire de l’extrait RTE 1609
3. Etude de l’effet de l’extrait RTE 1609 sur la motilité intestinale
4. Etude de l’activité spasmolytique de RTE 1609
III. EXPRESSION ET ANALYSES DES DONNEES
RESULTATS
I. PARTIE CHIMIQUE
1. Rendement de l’extraction
2. Résultats du criblage phytochimique
II. PARTIE PHARMACOLOGIQUE
1. Activité anti sécrétoire de l’extrait RTE 1609
2. Effet de l’extrait sur la motilité intestinale
3. Activité spasmolytique de l’extrait RTE 1609
DISCUSSION
CONCLUSION
BIBLIOGRAPHIE
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