Soutenance mémoire
DETECTION DES PROTEINES CARBONYLEES (OXYBLOT)
CANCER DU FOIE
Le foie est composé essentiellement de cellules appelées hépatocytes qui s’organisent en petits groupes, les lobules, autour d’une veine centrale. Dans 90 % des cas, le cancer primitif du foie se développe à partir des hépatocytes. On parle de carcinome hépatocellulaire (CHC) ou d’hépatocarcinome.D’autres formes plus rares de cancers primitifs du foie peuvent se développer à partir des cellules des canaux biliaires (cholangiocarcinome) ou beaucoup plus rarement, des vaisseaux sanguins (hémangio en dothéliome épithélioïde).Un cancer du foie survient lorsque des cellules du foie, initialement normales, se transforment et se multiplient de façon anarchique jusqu’à former une tumeur maligne.La segmentation du foie est de 4 zones anatomiques appelées lobes, elle se base sur des caractéristiques de forme externe du foie. Cependant, une autre segmentation existe, ces travaux ont fondé les bases de la chirurgie hépatobiliaire moderne, permettant notamment l’introduction et le développement des hépatectomies (Couinaud et al., 1957).Plusieurs facteurs jouent un rôle dans le développement du cancer (FCF, 2012). Comme le foie filtre le sang de toutes les parties du corps, les cellules cancéreuses d’ailleurs peuvent se loger dans le foie et commencer à croître. Les cancers qui commencent dans l’intestin se propagent souvent du foie. La capacité du foie de se régénérer peut aussi être liée au développement de cancers du foie. Les chercheurs ont identifié plusieurs facteurs de risque qui rendent les gens plus susceptibles de développer un cancer du foie. Parmi les personnes atteintes d’une maladie chronique du foie, les hommes sont plus susceptibles de développer un cancer du foie que les femmes. La raison en est inconnue.
Infection virale du foie : Une infection chronique, hépatite B ou hépatite C, peut entraîner le développement d’un cancer.Certains types de maladies du foie héréditaires comme l’hémo chromatose qui résulte en une accumulation excessive de fer dans le foie, ainsi que la déficience en alpha-1 antitrypsine, et la tyrosinémie peuvent entraîner le développement d’un cancer du foie plus tard durant la vie.
Cirrhose : la formation de tissu cicatriciel dans le foie ou cirrhose peut souvent entraîner un cancer. Les causes principales de la cirrhose du foie sont la consommation d’alcool, l’hépatite B et l’hépatite C chroniques et la stéatohépatite non alcoolique (SHNA).
Alcool : une utilisation excessive d’alcool est un facteur de risque connu pour le développement de la cirrhose alcoolique et du cancer du foie.
Obésité : la stéatose hépatique est liée à l’obésité et peut augmenter le risque de développer un cancer du foie.
Tabagisme : peut augmenter le risque de cancer du foie si vous êtes déjà atteint d’une maladie chronique du foie.
Stéroïdes anabolisants : une utilisation à long terme des stéroïdes anabolisants peut augmenter le risque d’un cancer du foie.
PATHOLOGIE CANCÉREUSE.
L’hépatocarcinogenèse décrit le processus de développement et d’évolution d’une lésion bénigne vers un carcinome hépatocellulaire de haut grade. En effet, le développement d’un CHC dans le foie peut être vu comme un processus à plusieurs étapes, induites par une variété d’événements. Les cirrhoses par exemple, peuvent stimuler les cellules du foie à se diviser entraînant une sensibilité à la carcinogenèse. Cependant, le CHC peut également se produire en l’absence de cirrhose, mais avec une plus faible probabilité. Le développement de nodules régénératifs est ainsi une des premières étapes de la formation d’une lésion cancéreuse. Un nodule régénératif est une zone bien sphérique de tissu montrant un élargissement en réponse à une circulation altérée. C’est une lésion bénigne, mais qui va favoriser la création de cellules dégénérescentes, pouvant entraîner une dysplasie (altération de l’architecture et de la fonction d’un tissu.), puis à un cancer hépatique (Esneault, 2009).
Cancer primitif
Le cancer du foie est la croissance et la propagation de cellules anormales dans le foie. Un cancer primitif du foie désigne une tumeur maligne qui s’est développée à partir des cellules du foie.
Métastases du foie
Le foie peut également être atteint par des métastases, c’est-à-dire des tumeurs formées de cellules cancéreuses qui se sont détachées d’une tumeur située ailleurs dans l’organisme (par exemple dans le côlon ou le sein).
Les symptômes du cancer du foie, aux premiers stades, n’entraîne pas de symptômes. Au stade avancé de la maladie, un patient peut présenter une perte de poids, perte d’appétit, douleur abdominale, jaunisse et apparition de liquide dans l’abdomen. Les traitements du cancer primitif du foie et des métastases hépatiques sont complètement différents.
TYPES DE CANCER DU FOIE
En l’absence d’une maladie du foie chronique, le cancer du foie est rare. Cependant, chez les patients atteints d’une maladie du foie sous-jacente, le cancer du foie peut être assez courant. La cause exacte du cancer du foie est inconnue. Il existe plusieurs types de tumeurs du foie, seulement quelques-unes sont cancéreuses. La classification la plus importante est de déterminer si les tumeurs sont bénignes (relativement sans danger) ou malignes (capables de se propager à partir du foie et par conséquent plus graves). Le cancer du foie peut aussi se développer à plus d’un site dans le foie et peut croître en tumeurs multiples. Ce profil est le plus souvent observé chez les personnes atteintes de cirrhose du foie.
Tumeurs bénignes.
L’hémangiomeest le type le plus courant de tumeur bénigne du foie. Il s’agit d’une croissance anormale des vaisseaux sanguins dans le foie qui commence dans le fœtus. Plus de 10 % de la population normale à des hémangiomes dans le foie (FCF, 2012). La plupart des gens ayant des hémangiomes ne présentent aucun symptôme et ne requièrent aucun traitement. Dans des cas rares, certains hémangiomes peuvent augmenter de volume et saigner, et le cas échéant, ils peuvent nécessiter une intervention chirurgicale pour les enlever.
Les adénomes hépatiques sont des tumeurs bénignes des cellules hépatiques.
La plupart n’entraînent pas de symptômes et ne requièrent pas de traitement. Les adénomes hépatiques surviennent plus souvent chez les femmes et semblent être déclenchés dans certains cas par les contraceptifs oraux ou par la grossesse.
L’hyperplasie nodulaire focale (HNF) est une excroissance de plusieurs types de cellules ressemblant à une tumeur. Bien que les tumeurs HNF soient bénignes, il peut être difficile de les distinguer des cancers du foie.
Tumeurs malignes
La forme la plus fréquente du cancer primaire du foie (un cancer qui commence dans le foie) chez les adultes s’appelle carcinome hépatocellulaire (CHC). Il s’agit d’un cancer des cellules hépatiques. Ce type de cancer peut présenter différents profils de croissance. Certains débutent sous forme d’une seule tumeur qui augmente de volume qui peut éventuellement se propager à d’autres parties du foie.
Le cholangiome est un autre cancer du foie qui prend son origine dans les petites voies biliaires (les canaux qui transportent la bile vers la vésicule biliaire).
Cependant, le plus souvent, lorsque le cancer est présent dans le foie, il n’a pas commencé là mais s’est propagé vers le foie à partir d’un cancer qui a commencé ailleurs dans le corps. Ces types de cancers sont nommés d’après l’endroit où ils ont commencé (site primaire) et sont considérés comme des cancers secondaires du foie ou métastases cancéreuses. Par exemple, un cancer qui a commencé dans les poumons et qui s’est propagé vers le foie s’appelle cancer pulmonaire métastasique avec propagation vers le foie. Les cancers secondaires du foie sont 30 fois plus prévalent que les cancers primaires du foie.
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Table des matières
SOMMAIRE
1. RESUME
2. LISTE DES ABREVIATIONS
3. TABLE DES FIGURES
4. LISTE DES TABLEAUX
REVUE BIBLIOGRAPHIQUE
1. INTRODUCTION
2. CANCER DU FOIE
3. PATHOLOGIE CANCÉREUSE
3.1. Cancer primitif
3.2. Métastases du foie
4. TYPES DE CANCER DU FOIE
4.1. Tumeurs bénignes
4.2. Tumeurs malignes
5. DIAGNOSTIQUE TRAITEMENT
7. PROPRIETES PHARMACODYNAMIQUES DU SORAFENIB
7.1. Mécanisme d’action et effets pharmacodynamiques
7.2. Angiogenèse
MATERIELS ET METHODES
1. CULTURE CELLULAIRE
1.1. Préparation de milieu de culture
1.2. Préparation de la culture cellulaire
1.3. Trypsination
2. DENOMBREMENT DES RESULTATS
3. TRAITEMENT ET RECOLTE DES CELLULES
4. DETECTION DES PROTEINES CARBONYLEES (OXYBLOT)
5. DETECTION DE S-NITROSYLATION DES PROTEINES PAR BIOTIN SWITCH
5.1. Détection de protéines biotinylées par SDS-PAGE
5.2. Purification des protéines biotinylées
6. DETECTION DE LA PROTEINE TYROSINE NITRATION
7. QUANTIFICATION DES PROTEINES
8. WESTERN BLOT
8.1. Électrophorèse de protéine sur gel de bi-acrylamide (SDS-page)
8.2. Transfert et immuno-détection (Western-blot) de protéines avec phosphatase alcaline ou PEROXYDASE
8.3. β-actine
8.4. Révélation par chimiluminescence
9. COUPES HISTOLOGIQUES AU MICROTOME
10. COUPES HISTOLOGIQUES AU CRIOSTATE
RESULTATS ET DISCUSSIONS
1. Résultats des quantifications des protéines
Détection des protéines biotinilées ( Biotin-Switch)
Caspase-8
Détection de Nitration en Tyrosine
Détection des protéines carbonylées (kit Oxiblot)
CONCLUSION
REFERENCES BIBLIOGRAPHIQUES
ANNEXES
1. Présentation de l’Instit de biomédecine de Séville IBIS
Présentation de l’IBIS
Mission
Vision
2. Sujet de recherche
Caractérisation génétique et fonctionnelle de cancer du pancréas. Les modèles cliniques et expérimentales
Mort/prolifération cellulaire dans le carcinome hépatocellulaire
Régénération hépatique par injection de cellules souches dans le foie. Les modèles cliniques et expérimentales
Chercheur Responsable
4. Kit Oxyblotc S7150
5. Réactifs de l’électrophorèse
6. Réactifs du tranfert sur membrane
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