Cycle de réplication du virus de l’hépatite B

La prévalence de l’hépatite B au Maroc

En 2000, André (26) a fait une étude comparative entre différents pays du monde, il a trouvé que la plupart des pays africains ont une endémicité élevée sauf le Maroc et la Tunisie qui font partie des zones d’endémicité intermédiaire. L’épidémiologie du virus de l’hépatite B (VHB) n’est pas précisément connue au Maroc. L’étude d’André s’est penchée sur l’évaluation de la prévalence de l’infection par le VHB chez une population active marocaine, et la détermination des facteurs de risque chez les malades trouvés positifs pour l’AgHBs. Un effectif de 16634 volontaires dont 10003 sont de sexe masculin et 6631 de sexe féminin, était dépisté pour l’AgHBs. Le dépistage du VHB a été réalisé par le test d’Elisa (sérologie).

Un total de 276 personnes est trouvé positif au test de dépistage, ces résultats montrent que le Maroc est un pays à faible endémicité avec une prévalence du portage de l’AgHBs estimée actuellement à 1,66 % (2,16% chez les hommes 0,90%chez les femmes). Cette étude démontre que la prévalence de l’Ag HBs est estimée actuellement à 1,66 % dans la population active marocaine. L’identification des facteurs de risque permet de dire que la prévention demeure la méthode la plus efficace pour contrôler avec succès l’infection par le VHB,(27)

La faible endémicité rapportée dans la présente étude montre le succès du programme national de vaccination contre le VHB. En effet, le Maroc fait partie des pays qui ont adhéré au programme de l’OMS pour la vaccination contre le VHB depuis 1999 (28) [17] Pour conclure, le VHB représente la 10ème cause de mortalité dans le monde et une des trois premières causes de décès en Asie et en Afrique. (29)

Extraction automatisée par le COBAS AmpliPrep

Le but de l’extraction est d’obtenir des acides nucléiques plus ou moins purs et plus ou moins concentrés. Le système d’extraction des acides nucléiques par le Cobas Ampliprep, utilise la technologie en billes magnétiques entourées de silicate. Les particules virales du VHB sont lysées par un tampon de lyse (Citrate de sodium dihydraté, 42,5% de thiocyanate de guanidine <5% de polydocanol , 0,9% de dithiothréitol ) permettant la libération des acides nucléiques qui se fixent sur les billes magnétiques entourées de silicate. Le système est composé d’un aimant qui permet l’accrochage des acides nucléiques pendant les étapes de lavages (Citrate de sodium sihydraté, <0,1% de N-méthlisothiazolone-HCI). Les acides nucléiques sont libérés par la suite en utilisant un tampon d’élution (0,2% de méthylparabéne).

Détection des produits PCR dans un test COBAS TaqMan 48

Le test TaqMan utilise une technologie PCR en temps réel, l’utilisation de sondes fluorescentes à double marquage permet une détection en temps réel de l’accumulation des produits PCR en surveillant l’intensité de l’émission des colorants fluorescents rapporteurs libérés pendant le processus d’amplification. Les sondes consistent en des oligonucléotides spécifiques du VHB et du SQ VHB marqués par un colorant rapporteur et par un colorant extincteur. Dans ce test, les sondes du VHB et du SQ sont marquées par différents colorants rapporteurs de fluorescence. Lorsque les amorces à colorants à double fluorescence sont intactes, la fluorescence du rapporteur est supprimée en raison de la proximité du colorant extincteur et à cause des effets Förster de transfert d’énergie.

Pendant la phase PCR, la sonde hybride une séquence cible et se trouve clivée par l’activité de la nucléase 5’→3’ de l’ADN-P Z05 thermostable. Une fois que les colorants rapporteur et extincteur sont libérés et séparés, l’extinction ne se produit plus et la fluorescence du colorant rapporteur augmente. L’amplification de l’ADN VHB et ADN du SQ est mesurée indépendamment à des longueurs d’ondes différentes.

Ce processus est répété pendant le nombre de cycles préprogrammés dans l’analyseur, augmentant ainsi l’intensité de l’émission des colorants rapporteurs individuels, permettant une identification indépendante de l’ADN VHB et ADN du SQ. L’intensité des signaux est fonction de la quantité initiale du matériel au commencement de la PCR. Les copies ne sont pas une unité internationale. Elle ne permet pas d’équivalence d’un pays à l’autre, d’où l’utilité de l’expression d’un même résultat en log. Le log est une expression mathématiques donc un langage international. Plus récemment, l’OMS a validé l’expression en UI qui est un langage commun, uniforme et standardisé.

Ce langage commun à tous, est une nécessité pour la recherche. La concentration d’ADN du HBV est exprimée en Unités Internationales (UI/ml). Le coefficient de conversion du nombre de copies/ml de HBV en UI/ml de HBV est de 5,82 copies/UI en utilisant les normes internationales d’ADN du virus de l’hépatite B établies par l’OMS pour les dosages par les techniques à acide nucléique. Les variations croissantes ou décroissantes de la charge virale peuvent aussi s’exprimer sous forme de 1 log, 2 log, etc. La figure suivante illustre un exemple d’un patient avec une charge virale positive.

Répartition par moyenne de log selon le sexe et l’âge

L’analyse de ces résultats montre que la répartition de la prévalence de HBV chez cette population étudiée, est hétérogène selon les cinq tranches d’âges étudiées. La moyenne des charges virales pour les deux sexes est de 2log, ce qui concorde avec l’étude d’André en 2000

Une charge virale faible, (négative chez les femmes) a été observée chez les sujets âgés de moins de 24 ans. Ceci peut être expliqué par le fait que cette tranche d’âge regroupe dans sa majorité les enfants ayant bénéficié d’une vaccination systématique dès leur jeune âge selon le programme de l’OMS. La charge virale la plus importante, et observée chez les sujets âgés entre 24 et 34. Elle est moins importante au niveau des autres tranches. Ce résultat ne concorde pas avec la statistique réalisées dans notre étude pour l’année 2013 (annexe3) et également avec l’étude faite en France par l’institut de veille sanitaire entre 2003-2004 (Antona 2006). La représentation de ces résultats sous forme d’histogramme est illustrée dans la figure 4.

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Table des matières

Remerciements
La liste des abréviations
La Liste des figures
Résumé
Généralité sur l’IPM
2) Organigramme d’IPM
Introduction
CHAPITRE 1 REVUEBIBLIOGRAPHIQUE
1) Découverte de l’hépatite B
2) Taxonomie
3)Structure
3-1)Morphologie
3-2)Organisation du génome
4) Cycle de réplication du virus de l’hépatite B
5) Epidémiologie
5-1) La prévalence de l’hépatite B à l’échelle mondiale
5-2) La prévalence du génotype de l’Hépatite B
5-3) La prévalence de l’hépatite B au Maroc
6-Mode de transmission
7-Symptômes
8-Traitements
9-Prévention
10-Vaccin
Chapitre II I-Matériel et méthodes
A) Déduire la charge Virale à partir du sang du patient
1) Prélèvements, transport et conservation des échantillons
2) Extraction automatisée par le COBAS AmpliPrep
3) Amplification et détection de l’ADN viral par PCR en temps réel
3.1. Principe de la méthode
3.2. Amplification de la cible
3.3. Détection des produits PCR dans un test COBAS TaqMan 48
Chapitre III résultats et discussion
1- Répartition globale selon le sexe et log
2-Répartition par âge et par sexe
3-Répartition par moyenne de log selon le sexe et l’âge
Références
Annexe1
Annexe 2
Annexe 3